益氣活血中藥復(fù)方通脈口服液干預(yù)DN的療效觀察及腎保護(hù)作用研究.pdf

1、目的： 探討益氣活血中藥復(fù)方通脈口服液干預(yù)糖尿病腎病的療效及腎保護(hù)作用。 方法： 一、臨床部分： 病例來源：廣東省中醫(yī)院本部及二沙、芳村分院的住院及門診病人。 診斷標(biāo)準(zhǔn)： ①西醫(yī)診斷標(biāo)準(zhǔn)： (1)糖尿病診斷標(biāo)準(zhǔn)：參照1999年WHO標(biāo)準(zhǔn)。 (2)糖尿病腎病分期標(biāo)準(zhǔn)：參照 Mogensen 標(biāo)準(zhǔn)及王海燕《腎臟病學(xué)》。 ②中醫(yī)證型診斷標(biāo)準(zhǔn)： 參照2002年版《中

2、藥新藥臨床研究指導(dǎo)原則》中關(guān)于氣虛證及血瘀證的辨證標(biāo)準(zhǔn)。 ③癥狀積分標(biāo)準(zhǔn)： 癥狀按無、輕、中、重記0、1、2、3分，舌脈記“有”為1 分，“無”為0分。 監(jiān)測(cè)項(xiàng)目：每二周監(jiān)測(cè)癥狀、舌脈、血壓、餐后 2h 毛細(xì)血管全血血糖，試驗(yàn)前后各監(jiān)測(cè)尿24h尿蛋白定量，血清尿素氮 (BUN)、血肌酐(SCr)、總膽固醇(TCh)、甘油三酯(TG)。 療程：8周。 治療方案： ①基礎(chǔ)治療： (1)

3、糖尿病健康教育、體育鍛煉及低鹽優(yōu)質(zhì)蛋白糖尿病飲食：每日食鹽攝入量≤6克，精蛋白攝入量：0.8g/Kg·d； (12)控制血壓：目標(biāo)：<130/80mmHg；可應(yīng)用非ACEI及ARB 外的所有降壓藥； (3)控制血糖：目標(biāo)：FPG≤7.0mmol/L 2HPG≤10.0mmol/L 全部應(yīng)用糖適平和/或胰島素治療； (4)對(duì)癥處理。 ②分組治療： (1)T組：通脈口服液：1支/次，3次/日，口服；

4、 (2)L組：洛汀新片：10mg/次，1次/日，口服。 調(diào)查方法： ①藥物洗脫：共2周，停用所有ACEI、ARB、益氣活血類中藥等制劑：給予受試者DM 教育，低鹽低脂優(yōu)質(zhì)低蛋白飲食；血壓控制于<130/80mmHg 水平；血糖控制在FPG≤7/0mmol/L，2HPG≤10.0mmol/L 水平；血脂控制在 TCH≤5.98mmol/L，TG≤1.7mmol/L 水平。結(jié)束復(fù)查 24h 尿蛋白定量； ②分組

5、：將合格病例分為洛汀新組(L組)及通脈組(T組)； ③試驗(yàn)過程依從性：采用藥物記量的方法了解患者依從性。研究者應(yīng)耐心向患者做好解釋工作，提前電話通知，使其充分理解，配合研究。免除掛號(hào)費(fèi)以保證按期就診率。 ④干擾和沾染的控制：所有病人受試期間不得接受試驗(yàn)措施以外的相關(guān)藥物或治療，盡量保證病人按照治療方案規(guī)定用藥，而不受其他藥物等治療措施的影響。 二、實(shí)驗(yàn)部分： 實(shí)驗(yàn)一：通脈口服液對(duì)實(shí)驗(yàn)性糖尿病模型大鼠腎臟保

6、護(hù)作用的研究選鼠分組：選用SD雄性大鼠，設(shè)立正常對(duì)照組(C組)；余動(dòng)物采用STZ單次腹腔注射方法制備糖尿病(DM)動(dòng)物模型，DM大鼠模型成功后隨機(jī)分為模型組(M組)、通脈組(T組)及洛汀新組(L組)。 干預(yù)起始點(diǎn)：DM 模型成功，分組后即開始干預(yù)。 干預(yù)方式：①飼料：T、L、M 組給予隔日高脂飼料，C 組給予普通飼料；實(shí)驗(yàn)期間均自由進(jìn)食和飲水；②藥物：T組給予通脈口服液灌胃，L組給予洛汀新灌胃，c及M組給予生理鹽水灌胃。

7、 干預(yù)時(shí)限：6周。 大鼠淘汰標(biāo)準(zhǔn)：①干預(yù)過程中，測(cè)定血糖值<16.8mmol/L 者，予以淘汰；②6周后處死大鼠，光鏡示腎組織無明顯病變者，予以淘汰。 觀察項(xiàng)目：大鼠一般情況、體重、尿量、24h 尿蛋白定量、總膽固醇 (TCh)、甘油三脂(TG)、血糖(BG)、血尿素氮(BUN)、血肌酐(SCr)、腎重/體重比值(K/W)；光鏡、電鏡下進(jìn)行腎臟組織病理形態(tài)學(xué)觀察。 實(shí)驗(yàn)二：通脈口服液對(duì)實(shí)驗(yàn)性糖尿病腎病模型

8、大鼠的腎臟保護(hù)作用研究選鼠、C組設(shè)立、DM 動(dòng)物模型制備：同實(shí)驗(yàn)一。 DN 模型制備及分組：DM 大鼠模型成功后，給予隔日高脂飼料飼養(yǎng)4周， DN大鼠模型成功，隨機(jī)分為M組、T組及L組。 干預(yù)起始點(diǎn)：DN模型成功，分組后即開始干預(yù)。 干預(yù)方式、干預(yù)時(shí)限、大鼠淘汰標(biāo)準(zhǔn)：同實(shí)驗(yàn)一。 觀察項(xiàng)目：測(cè)量腎小球截面積(MGA)、細(xì)胞外基質(zhì)截面積(MMA)、腎小球基底膜厚度(GBM)，計(jì)算細(xì)胞外基質(zhì)截面積/腎小球截面積

9、(MMA/MGA)比值； 余項(xiàng)目同實(shí)驗(yàn)一。 實(shí)驗(yàn)三：通脈口服液對(duì)實(shí)驗(yàn)性糖尿病腎病模型大鼠腎組織MMP-9及其作用底物、調(diào)控因子表達(dá)影響的研究標(biāo)本來源：選擇實(shí)驗(yàn)二干預(yù)后C組、M組、T 組大鼠腎組織，每組隨機(jī)選擇6例標(biāo)本。 實(shí)驗(yàn)方法：免疫組化法。 觀察項(xiàng)目：測(cè)定腎組織 Col-Ⅳ、MMP-9、TIMP-1、TGF-β<,1>等的免疫組化染色面積、面密度及積分光密度，計(jì)算 MMP-9/TIMP-1 免疫組化染色

10、面積比值。 結(jié)果： 一、臨床部分： ①療程前兩組患者一般情況、24h 尿蛋白定量、腎功能等，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；療程中，兩組患者血壓、血糖、血脂等差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)； ②療程后T組DN患者24h 尿蛋白定量、癥狀積分較治療前明顯降低，差異有顯著性統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P(0.01)； ③療程后T組與L 組比較：24h 尿蛋白定量前后差值，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，T 組

11、癥狀積分前后差值高于L組，差異有顯著性統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P(0.01)。 二、實(shí)驗(yàn)部分： 實(shí)驗(yàn)一：通脈口服液對(duì)實(shí)驗(yàn)性糖尿病模型大鼠腎臟保護(hù)作用的研究體重、尿量： ①T、L、M三組較C組大鼠尿量增加，體重降低，差異有顯著性統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)； ②T組大鼠尿量較L、M組有減少的趨勢(shì)，體重較L、M組有增加的趨勢(shì)，但T、L、M三組間尿量及體重差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。 24h 尿蛋白定量：

12、 ①T、L、M三組 24h 尿蛋白定量較C組升高，差異有顯著性統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.01)； ②T組24h尿蛋白定量較M組降低，差異有顯著性統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；與L組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。 血糖： ①T、L、M三組與C組比較血糖持續(xù)升高，差異有顯著性統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P<0.01)； ②T、L、M三組組間血糖比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。 血尿素氮、肌酐： C、

13、T、L、M 四組組間比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。 總膽固醇、甘油三脂： ①T、L、M 三組 TCh、TG較C組均升高，差異有顯著性統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P(0.01)； ②T組 TCh、TG 較M組、L 組均降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05或P<0.01)。腎重/體重比值； 腎組織病理形態(tài)學(xué)： ①M(fèi)組。腎小球肥大、系膜區(qū)增寬等病變較C組明顯加重； ②T組腎小球肥大、系膜區(qū)增寬等病變較M

14、組減輕，和L組無明顯差異。 實(shí)驗(yàn)二：通脈口服液對(duì)實(shí)驗(yàn)性糖尿病腎病模型大鼠的腎臟保護(hù)作用研究體重、尿量： T組大鼠尿量較M組、L組明顯減少，體重較M組、L組增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01或P<0.05)。 尿素氮： T組較M組、L組均降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01或P<0.05)。 24h 尿蛋白定量、總膽固醇、甘油三脂、血糖、血肌酐、腎重/體重比值：結(jié)果同實(shí)驗(yàn)一。 腎組織病理形

15、態(tài)學(xué)： ①M(fèi)組系膜區(qū)增寬、基底膜增厚及腎小管上皮細(xì)胞空泡變性等，較C組明顯加重； ②T組系膜區(qū)增寬、基底膜增厚及腎小管上皮細(xì)胞空泡變性等，較M組明顯減輕，和L組無明顯差異。 ①M(fèi)組 MMA/MGA 比值較C組增加，差異有顯著性統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P<0.01)； ②T組MMA/MGA 比值較M組、L 組降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01或．P<0.05)。 腎小球基底膜厚度： ①M(fèi)組GBM較C

16、組增厚，差異有顯著性統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)； ②T組GBM較M組變薄，差異有顯著性統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，與L組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。 實(shí)驗(yàn)三：通脈口服液對(duì)實(shí)驗(yàn)性糖尿病腎病模型大鼠腎組織MMP-9及其作用底物、調(diào)控因子表達(dá)影響的研究Ⅳ型膠原：主要表達(dá)定位于腎小球，和C組比較，M組呈強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)；T組免疫組化染色面密度及積分光密度均較M組降低，差異有顯著性，差異有顯著性統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)：

17、 結(jié)論： 1．益氣活血中藥復(fù)方通脈口服液臨床觀察，結(jié)果顯示：該中藥可以有效改善DN患者的臨床癥狀，減輕尿蛋白，保護(hù)腎功能：動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：該中藥可以有效減輕實(shí)驗(yàn)性DN模型大鼠尿蛋白、調(diào)節(jié)血脂及改善腎臟病理?yè)p害。 2．益氣活血中藥復(fù)方通脈口服液對(duì)DN腎臟保護(hù)作用的機(jī)制可能是：改善脂質(zhì)代謝，減輕尿蛋白，抑制腎組織TGF-β<,1>表達(dá)，調(diào)節(jié)MMP-9/TIMP-1 比例失衡，增加Ⅳ型膠原降解，減輕ECM積聚，改善腎臟肥