益氣活血中藥延緩血管老化的作用與機(jī)制研究.pdf

1、隨著二十一世紀(jì)的到來,人口老齡化已成為影響人類發(fā)展的重要問題之一。老齡人群具有心血管疾病發(fā)病率高的特點,高血壓、冠心病、心功能不全等心血管疾病發(fā)生率隨增齡急劇上升,在這些心血管疾病中存在著明顯的心血管老化的表現(xiàn)。因此,針對這一龐大的老齡人群,研究心血管衰老,即隨著增齡心血管系統(tǒng)結(jié)構(gòu)和功能發(fā)生的特征性改變將成為熱點。人參、三七、川芎屬于中藥益氣活血藥范疇,中醫(yī)學(xué)認(rèn)為其有“延年不老”的功效?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究顯示,3種藥物的有效成分與抗衰老作用

2、密切相關(guān)。本研究以血管老化為研究對象,觀察血管壁結(jié)構(gòu)和功能的變化,闡明益氣活血中藥延緩血管老化的細(xì)胞和分子機(jī)制,為中藥延緩血管老化提供實驗依據(jù)。
　　 本論文分為三部分:文獻(xiàn)綜述、基礎(chǔ)研究和臨床文獻(xiàn)系統(tǒng)評價。
　　 1.文獻(xiàn)綜述通過對87篇文獻(xiàn)的閱讀、整理和總結(jié),探討和綜述了細(xì)胞衰老與血管老化的關(guān)系及其研究進(jìn)展,并對中醫(yī)學(xué)對衰老和血管老化的認(rèn)識進(jìn)行了初步總結(jié),提出今后中醫(yī)藥研究血管老化的方向。
　　 2.基礎(chǔ)研究

3、包括以下三個基礎(chǔ)實驗:
　　 實驗一:益氣活血中藥延緩衰老小鼠血管老化的實驗研究
　　 目的:探討衰老小鼠血管老化所導(dǎo)致的血管壁結(jié)構(gòu)和功能的改變以及益氣活血中藥人參、三七、川芎提取物的干預(yù)作用。方法:建立自然衰老小鼠模型,小鼠分為衰老模型組、人參三七川芎提取物高、中、低劑量組、維生素E組(VitE組)、另設(shè)青年對照組,觀察各組主動脈形態(tài)學(xué)改變,檢測血漿血管緊張素Ⅱ(AngⅡ)含量、血管組織抗超氧陰離子、晚期糖基化終末產(chǎn)物

4、(AGEs)、基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP-2)與其抑制劑(TIMP-2)以及兩者之比MMP-2/TIMP-2。結(jié)果:人參三七川芎提取物能夠改善衰老小鼠主動脈形態(tài)學(xué)衰老變化,降低血管組織中活性氧的生成,減少AGEs生成,抑制MMP-2的活性,調(diào)節(jié)MMP-2/TIMP-2的平衡。結(jié)論:人參三七川芎提取物能降低衰老小鼠血管的僵硬度、減少血管重構(gòu),延緩小鼠血管老化的發(fā)生。
　　 實驗二:益氣活血中藥延緩.AngⅡ誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞衰老的機(jī)制研究<

5、br>　　 目的:觀察AngⅡ誘導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞(HUVECs)衰老的病理變化,以及人參、三七、川芎提取物的干預(yù)作用和機(jī)制。方法:體外培養(yǎng)的內(nèi)皮細(xì)胞加入終濃度為10-6mol/L AngⅡ誘導(dǎo)細(xì)胞衰老,造成內(nèi)皮細(xì)胞衰老模型。細(xì)胞分為空白對照組、AngⅡ衰老模型組、人參三七川芎高、低劑量組和纈沙坦組,采用SA-β-半乳糖染色法觀察細(xì)胞衰老改變,流式細(xì)胞儀分析細(xì)胞周期,激光共聚焦顯微鏡觀察細(xì)胞內(nèi)活性氧(ROS)含量,硝酸還原酶法檢測培養(yǎng)液一氧

6、化氮(NO)和抗超氧陰離子水平,western-blot方法檢測各組細(xì)胞AngⅡ1型和2型受體(AT1R和AT2R)、NAD(P)H氧化酶p47phox的蛋白表達(dá)。結(jié)果:高、低劑量中藥處理后改善了細(xì)胞的衰老狀態(tài),β-gal染色陽性細(xì)胞數(shù)減少,G0-G1期細(xì)胞減少,G2-M期細(xì)胞增加,ROS熒光強(qiáng)度減弱,抗超氧陰離子、NO含量較.AngⅡ衰老模型組增加,p47phox蛋白表達(dá)下調(diào),AT1R蛋白表達(dá)較AngⅡ衰老模型組上調(diào)。結(jié)論:人參三七川

7、芎提取物能夠延緩AngⅡ誘導(dǎo)的HUVECs衰老,可通過AT1R下調(diào)NAD(P)H氧化酶p47phox表達(dá),進(jìn)而使ROS產(chǎn)生減少,達(dá)到延緩內(nèi)皮細(xì)胞衰老的目的。
　　 實驗三:益氣活血中藥延緩內(nèi)皮細(xì)胞復(fù)制性衰老的機(jī)制研究
　　 目的:觀察內(nèi)皮細(xì)胞復(fù)制性衰老的病理變化,以及人參、三七、川芎提取物的干預(yù)作用和機(jī)制。方法:體外培養(yǎng)的HUVECs傳至第8代,造成內(nèi)皮細(xì)胞復(fù)制性衰老模型。細(xì)胞分為8代衰老模型組、人參三七川芎提取物高、低

8、劑量組、Vit E組,采用SA—β-gal染色法觀察細(xì)胞衰老改變,流式細(xì)胞儀分析細(xì)胞周期,激光共聚焦顯微鏡觀察細(xì)胞內(nèi)ROS含量,硝酸還原酶法檢測培養(yǎng)液NO和抗超氧陰離子水平,western-blot方法檢測各組細(xì)胞.AT1R和AT2R,NAD(P)H氧化酶p47phox的蛋白表達(dá)。結(jié)果:高、低劑量中藥處理后,β-gal染色陽性細(xì)胞數(shù)減少,G1-G1期細(xì)胞減少,G2-M期細(xì)胞增加,ROS熒光強(qiáng)度減弱,抗超氧陰離子、NO含量較8代衰老模型組

9、增加,p47phox,AT1R,AT2R蛋白表達(dá)下調(diào),差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(均P<0.05)。結(jié)論:人參三七川芎提取物能夠延緩內(nèi)皮細(xì)胞復(fù)制性衰老,通過活性氧途徑下調(diào)NADPH氧化酶p47phox的表達(dá),最終使ROS產(chǎn)生減少,可能是其延緩內(nèi)皮細(xì)胞衰老的主要因為之一。
　　 3.臨床文獻(xiàn)系統(tǒng)評價中國人群中老年人冠心病與血管老化相關(guān)指標(biāo)關(guān)系的Meta分析
　　 目的:對中國人群中老年人冠心病與血管老化相關(guān)指標(biāo)關(guān)系進(jìn)行系統(tǒng)評價。方

10、法:①以[(冠心病)and(全部檢索條目:踝臂指數(shù)or脈搏波速度or脈壓差or IMT)]的檢索式檢索中國生物醫(yī)學(xué)文獻(xiàn)光盤數(shù)據(jù)庫,年限為1994年1月至2008年12月。②由2位研究者按照文獻(xiàn)納入、排除標(biāo)準(zhǔn)獨立進(jìn)行文獻(xiàn)篩選,意見不同者通過討論解決。③獲取文獻(xiàn)的相關(guān)研究特征資料,并加以評價。④對合格的病例對照試驗,進(jìn)行定量的Meta分析。結(jié)果:①共檢索到44個文獻(xiàn)。②經(jīng)兩次篩選,剔除不符合要求以及重復(fù)報道的文獻(xiàn),最終共有14篇文獻(xiàn)入選評價