芪藍糖脂寧膠囊復方再優(yōu)化研究及其糖脂雙調(diào)的機理探討.pdf

1、糖尿病(Diabetes Mellitus，DM)是一種常見的內(nèi)分泌代謝性疾病，其基本病理特點為胰島素分泌絕對或相對不足，或外周組織對胰島素不敏感，引起以糖代謝紊亂為主，包括脂肪、蛋白質(zhì)代謝紊亂的一種全身性疾病。因此，單純控制血糖不能完全消除糖尿病患者冠心病等大血管并發(fā)癥，往往同時進行調(diào)脂治療。中醫(yī)傳統(tǒng)復方注重整體調(diào)節(jié)，標本兼治，近年來，在治療糖尿病合并高脂血癥方面表現(xiàn)了巨大的潛力。 芪藍糖脂寧膠囊是導師高學敏教授針對糖尿病合并

2、高脂血癥的病因病機，在中醫(yī)基礎理論指導下，結(jié)合現(xiàn)代藥理學研究成果創(chuàng)制的科研處方。前期張德芹博士已對其進行了文獻、理論和藥效學實驗研究，證明其有顯著的糖脂雙調(diào)的效果，是治療糖尿病合并高脂血癥的有效良方。但是，該方含有黃芪、絞股蘭、紅曲等九味中藥，藥味較復雜，為生產(chǎn)、質(zhì)控和服用都帶來了不便，因此，本課題以此方為研究對象，采用直接實驗設計法，對其進行復方再優(yōu)化研究，然后，對再優(yōu)化所得最優(yōu)方進行糖、脂雙降的藥效和機理探討。 1.文獻研究

3、 1．1 糖尿病合并高脂血癥與胰島素抵抗全面查閱了近年來國內(nèi)外糖尿病合并高脂血癥、胰島素抵抗及理論的相關研究文獻資料，闡明了胰島素抵抗為糖、脂代謝紊亂的共同病因，并對糖尿病合并高脂血癥胰島素抵抗的發(fā)病機理及研究方法進行了系統(tǒng)的總結(jié)和綜述。 1．2 中藥復方再優(yōu)化研究進展查閱整理了目前應用于復方再優(yōu)化的主要實驗設計方法及數(shù)據(jù)優(yōu)化處理方法，掌握了相關項目科研的研究動念。 2．實驗研究 2．1 芪藍糖脂寧復方再

4、優(yōu)化試驗運用直接實驗設計法安排藥效實驗，獲得實驗信息，在前期復方再優(yōu)化理論研究的基礎上，結(jié)合專業(yè)知識，將藥味間的交互作用引入變量篩選過程，利用SAS軟件進行多元線性回歸分析，得到針對不同效應指標的回歸方程，并預測出各指標相應的優(yōu)化方。依據(jù)傳統(tǒng)中醫(yī)藥理論及各優(yōu)化方中藥味和藥量出現(xiàn)的頻次，擬合出最優(yōu)方——芪曲糖脂寧膠囊(QQTZN)。 篩選所得最優(yōu)方QQTZN由黃芪、葛根等五味中藥組成，藥味精良，且符合醫(yī)理藥理，功能益氣健脾，生津止

5、渴，化瘀降濁。 2．2最優(yōu)方藥效實驗驗證 采用高糖高脂飼料合并小劑量鏈脲佐菌素注射的方法復制2型糖尿病合并高脂血癥模型。在此基礎上觀察最優(yōu)方對模型大鼠糖、脂代謝以及胰腺和肝臟病理形態(tài)學改變。 綜上所述，最優(yōu)方藥少力專，糖脂雙調(diào)的藥效學作用確切，明顯優(yōu)于反證方，與理論預測結(jié)果一致，進一步證實了復方再優(yōu)化方法對確有療效的中藥復方的篩選和精練處方的作用。結(jié)合現(xiàn)代醫(yī)學知識和中醫(yī)傳統(tǒng)理論，分析反證方的組方特點，可以看出數(shù)據(jù)

6、篩選剔除了部分滋陰及降脂作用相對較強而補氣和降糖作用相對較弱的中藥，從而達到精練處方的目的，使最優(yōu)方更突出了補氣健脾，化瘀降濁，進而糖脂雙調(diào)的特點。 2．3機理探討 2．3．1對胰島素受體前水平影響 采用放射免疫技術研究了最優(yōu)方對模型大鼠血清胰島素含量的影響，結(jié)果表明，QQTZN高劑量組與模型組相比，血清胰島素水平明顯降低，胰島素敏感性指數(shù)明顯升高。中、低劑量組與模型組相比，血清胰島素水平無明顯變化，但胰島素敏感

7、性指數(shù)明顯升高。 采用免疫組化技術研究了最優(yōu)方對模型大鼠胰島α、β細胞胰島素、胰高糖素表達的影響。結(jié)果顯示，QQTZN高、中、低劑量組β細胞數(shù)量比模型組增多，胰島素表達較模型組明顯增強；α細胞數(shù)量比模型組減少，胰高血糖素表達較模型組明顯降低。 上述結(jié)果表明，QQTZN可以通過增加胰島素敏感性，修復鏈脲佐菌素(STZ)造成的胰島B細胞損傷，以及調(diào)節(jié)胰島Q細胞分泌胰高糖素水平來影響胰島素發(fā)揮正常的生物效應。 2．3．

8、2對胰島素受體后PI-3K信號傳導途徑的影響 采用免疫組化技術研究了最優(yōu)方對肝臟組織IRS-2及PI-3K表達的影響。結(jié)果表明，最優(yōu)方高、中、低劑量組肝臟組織IRS-2表達較模型組明顯提高。QQTZN低劑量組與模型組相比PI-3K的表達有明顯提高，QQTZN高、中劑量組PI-3K表達與模型組相比有升高的趨勢，但無顯著差異。 采用RT-PCR產(chǎn)物半定量技術對實驗大鼠骨骼肌GluT4mRNA進行了檢測，結(jié)果表明，QQTZN高

9、、低劑量組GluT4 mRNA表達與模型組相比有顯著升高。 從上述結(jié)果可以看出，QQTZN可以使IRS-2、PI-3K以及GluT4的表達有不同程度的提高，表明該藥可以從多個位點改善胰島素的信號傳導障礙，使胰島素得以發(fā)揮其正常的生理功能，調(diào)節(jié)糖、脂代謝。 2．3．3對PPARγ調(diào)控及其它脂肪源性細胞因子的影響 采用免疫組化技術研究了最優(yōu)方對肝臟組織PPARγ表達的影響。結(jié)果表明，與模型組相比，高、中劑量組有不同程

10、度的增加模型大鼠肝臟PPARγ表達的作用。 采用ELISA法檢測了最優(yōu)方對脂肪組織TNF-α表達的影響。結(jié)果顯示，QQTZN高、中劑量組有顯著降低脂肪中的TNF-α濃度的作用。提示最優(yōu)方可通過降低TNF-α水平，解除TNF-α對脂肪和肌肉GluT4表達抑制，刺激脂肪分解等作用提高胰島素敏感性。 采用比色法研究了最優(yōu)方對血清中FFA含量的影響。結(jié)果表明，QQTZN高、中、低劑量組均可顯著降低血清中FFA的含量。提示最優(yōu)方可

11、以通過降低脂毒性對機體的損害而達到調(diào)節(jié)糖、脂代謝的作用。上述結(jié)果表明，QQTZN可增加PPARγ表達，抑制TNF-α及FFA的釋放，調(diào)節(jié)脂代謝，而且可以通過抑制TNF-α、FFA的釋放，及改善胰島素信號傳導通路障礙等多條途徑增加胰島素的敏感性，從而對糖代謝進行調(diào)節(jié)。 本課題的創(chuàng)新點在于： (1) 在張學中教授的指導下，將直接實驗設計法用于中藥有效復方的再優(yōu)化研究，在考察單味藥對藥效貢獻度的基礎上，根據(jù)中藥復方用藥的特點，

12、考慮了多味藥交互作用對藥效的貢獻度，更加符合中醫(yī)基礎理論及用藥規(guī)律。 (2) 本課題研究的是中藥復方對糖尿病合并高脂血癥的影響，發(fā)病機理存在糖代謝紊亂和脂代謝紊亂并存的現(xiàn)象，因此在機理探討方面，從二者的共同致病因素胰島素信號傳導通路障礙入手，同時考察了對脂肪源性細胞因子的影響，更好的解決了糖、脂共調(diào)的問題，為中藥干預糖、脂代謝的作用機理研究提供了新的思路。 綜上所述，通過本實驗研究，在原有效復方芪藍糖脂寧的基礎上凝煉出了