白酒、卡托普利對兔頸動脈粥樣硬化消退作用的實驗研究.pdf

1、目的：通過建立兔頸動脈粥樣硬化 (carotid atherosclerosis，CAS) 模型，探討適量飲用國產(chǎn)白酒、卡托普利對兔頸動脈粥樣硬化的消退作用，及其在生物化學、病理學和分子生物學方面抗動脈粥樣硬化(AS)的作用機制，從而為白酒、卡托普利防治AS 提供實驗佐證。 材料與方法：健康雄性新西蘭 (New Zealand) 白兔40只觀察一周后，進入實驗。將動物按體重編號后，隨機數(shù)字先分為頸動脈粥樣硬化(CAS)模型組(3

2、2只)和正常對照組(8只)。10周末將其中模型組8只動物行血管取材以做陽性對照。CAS模型組24只動物再隨機分為3組：(1)自然消退組：單純改喂基礎(chǔ)飼料；(2)適量飲酒組：除改喂基礎(chǔ)飼料外給予白酒 0.6g·kg<'-1>·d<'-1>；(3) 卡托普利組：飼以基礎(chǔ)飼料的基礎(chǔ)上，給予卡托普利 2.5mg·kg<'-1>·d<'-1>；繼續(xù)喂養(yǎng)6周。于0周(實驗前)、10周末、13 周末、16周末測兔的血清膽固醇(TCH)、甘油三酯(TG

3、)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白膽固醇 (LDL-C) 及血糖(GLU)。實驗結(jié)束后，分離切取頸動脈行組織形態(tài)學、內(nèi)膜中層厚度、斑塊面積、血管狹窄程度觀察及核轉(zhuǎn)錄因子-kBp65 (NF-kB p65)的免疫組織化學分析。 結(jié)果：至10周末，頸動脈粥樣硬化模型組 TCH、TG、HDL-C、LDL-C 及 GLU均明顯升高，與正常對照組相比有顯著差異(P<0.05)，三個模型組之間無明顯差異(P>0.05)。13

4、周末，頸動脈粥樣硬化模型組 TCH、TG、LDL-C 及GLU均有所下降，但仍高于正常對照組(P<0.01)；適量飲酒組 HDL 升高和 TCH、LDL-C 下降程度明顯高于自然消退組和卡托普利組(P<0.05)，自然消退組和卡托普利組相比無差異(P>0.05)。16 周末，CAS 模型組血糖基本接近正常對照組，而 TCH、HDL-C 和 LDL-C仍明顯高于正常對照組 (P<0.01)；適量飲酒組 TCH、LDL-C 下降和 HDL-

5、C 升高的程度，與自然消退組相比亦有明顯統(tǒng)計學意義(P<0.05)，而卡托普利組和自然消退組兩組間差異不明顯(P>0.05)。 病理學形態(tài)學觀察：標本在40及200倍光鏡下可見：正常對照組兔頸動脈壁結(jié)構(gòu)清晰，內(nèi)膜形態(tài)完整，無內(nèi)膜增厚，單層緊貼內(nèi)彈力板，內(nèi)彈力板連續(xù)完整；中層平滑肌細胞(SMC)排列整齊，呈長行、橢圓形和梭形，胞質(zhì)呈嗜酸性紅染，無明顯增殖及脂質(zhì)沉積；在10周末和16周末的各頸動脈粥樣硬化模型組均可見斑塊形成，斑塊內(nèi)

6、、內(nèi)皮下和中膜淺層可見大量增生的泡沫細胞，多者可達10余層，泡沫細胞聚集處向管腔內(nèi)突出，斑塊表層可見纖細的纖維帽，偶見膽固醇結(jié)晶和鈣鹽沉積，內(nèi)膜下可見內(nèi)彈力纖維斷裂，中層平滑肌細胞排列紊亂，細胞核不規(guī)則，細胞向內(nèi)膜下遷移并吞噬脂質(zhì)，很多斑塊內(nèi)可見單核巨噬細胞粘附。 血管指標的結(jié)果： 內(nèi)膜中層厚度：各模型組與正常對照組比較，內(nèi)膜中層厚度明顯增厚，正常對照組為4.25±0.89μm，10周模型處理組、自然消退組、適量飲酒組和

7、卡托普利組分別為 24.88±2.90μm、18.25±1.67μm、14.50±1.60μm、14.88±1.89μm，與正常對照組比較差異明顯(P<0.01)，有統(tǒng)計學意義；自然消退組、適量飲酒組和卡托普利組相對于10周模型處理組，內(nèi)膜中層厚度增生的程度明顯減輕，差異明顯(P<0.01)；適量飲酒組和卡托普利組內(nèi)膜中層厚度增生的程度減輕最明顯，與自然消退組比較(P<0.01)，有統(tǒng)計學意義，而兩組間無統(tǒng)計學意義(P=0.718)。

8、 斑塊面積：正常對照組未見動脈粥樣硬化斑塊形成，10 周模型處理組、自然消退組、適量飲酒組和卡托普利組斑塊面積分別為 31600.25±2761.42μm<'2>、19946.50±1217.21μm<'2>、17964.63±538.45μm<'2>、17545.50±1131.54μm<'2>，和正常對照組比較有顯著差異(P<0.01)；10 周模型處理組斑塊面積最重，自然消退組次之，適量飲酒組和卡托普利組最輕，四組之間，除適

9、量飲酒組和卡托普利組相比無差異外(P=0.325)，其余各組之間均有明顯差異(P<0.01)。 斑塊面積/內(nèi)彈性膜包圍面積：10 周模型處理組、自然消退組、適量飲酒組和卡托普利組分別為(4.91±0.51) ％、(2.82±0.20)％、(2.49±0.26)％、(2.53±0.17)％。各組相比，除適量飲酒組和卡托普利組無差異外(P=0.678)，其余各組之間均有明顯統(tǒng)計學意義(P<0.05)。 免疫組化的結(jié)果：本研究

10、發(fā)現(xiàn)，正常對照組家兔未見NF-kB p65 的陽性表達。各高脂模型組均可見NF-kB p65在頸動脈粥樣斑塊內(nèi)呈陽性表達，斑塊內(nèi)的細胞核及胞質(zhì)中均可見大量的NF-kB p65沉積，中層平滑肌亦見陽性表達，較斑塊內(nèi)弱。10周末模型處理組 NF-kB p65 染色強度明顯高于其他各組，自然消退組次之，適量飲酒組和卡托普利組頸動脈粥樣硬化斑塊內(nèi)NF-kB p65表達最弱，陽性面積百分比分別為(42.73±2.81)％、(22.95±2.36)

11、％、(16.68±1. 67)％和(16.06±1.88)％；適量飲酒組和卡托普利組，與自然消退組相比有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。 結(jié)論： 1、單純高脂飲食喂養(yǎng)家兔，能夠成功制造家兔頸動脈粥樣硬化模型，這些方法比人工損壞內(nèi)膜造成的家兔頸動脈粥樣硬化模型，更加科學、安全和準確，而且這符合動脈粥樣硬化的自然形成過程。 2、頸動脈粥樣硬化斑塊最容易在頸動脈分叉處發(fā)生，適量飲酒和卡托普利明顯減輕血管內(nèi)膜中層的厚度，使已形

12、成的粥樣斑塊面積明顯消退，血管狹窄明顯改善，發(fā)揮了抗動脈粥樣硬化作用。 3、適量飲酒和卡托普利對CAS病變都具有一定的消退作用，且兩者相比，作用效果未見明顯差異。 4、適量飲酒可顯著降低 TCH、LDL-C 的水平，升高 HDL-C，這可能是其抗動脈粥樣硬化的機制之一，而對TG影響不大；卡托普利對脂質(zhì)代謝影響不大。 5、NF-kB 的不適當激活是引起炎癥和氧化損傷的關(guān)鍵步驟，因而控制NF-kB 不適當激活便成為炎