轉(zhuǎn)化生長因子-β1在組織工程心臟瓣膜構(gòu)建中的應(yīng)用.pdf

1、第一部分轉(zhuǎn)化生長因子-β1對(duì)體外構(gòu)建組織工程心臟瓣膜的作用研究目的研究轉(zhuǎn)化生長因子-β1(TGF-β1)在組織工程心臟瓣膜(TEHV)體外構(gòu)建中的作用。方法經(jīng)胰酶/EDTA、去污劑TritonX-100和核酸酶處理，去除豬主動(dòng)脈瓣葉的細(xì)胞成分，然后在其表面種植大鼠肌成纖維細(xì)胞，構(gòu)建TEHV。實(shí)驗(yàn)組培養(yǎng)基中添加TGF-β1(10ng/ml)，對(duì)照組采用普通培養(yǎng)基。體外培養(yǎng)2w后取瓣葉，作HE染色和掃描電鏡觀察，以及羥脯氨酸含量、DNA含量

2、、瓣葉最大負(fù)荷力檢測(cè)，應(yīng)用逆轉(zhuǎn)錄—聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)方法檢測(cè)瓣膜細(xì)胞MMP-13和TIMP-1mRNA的表達(dá)。 結(jié)果：實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組比較，HE染色和掃描電鏡顯示細(xì)胞緊密聯(lián)合且細(xì)胞外基質(zhì)更豐富，羥脯氨酸含量和DNA含量增高，最大負(fù)荷力提高，MMP-13mRNA和TIMP-1mRNA的表達(dá)增強(qiáng)。結(jié)論TGF-β1在TEHV體外構(gòu)建過程中能促進(jìn)細(xì)胞的生長和增殖，加強(qiáng)ECM分泌，提高瓣膜的最大負(fù)荷力。 第二部分轉(zhuǎn)化生長因

3、子-β1基因轉(zhuǎn)染細(xì)胞構(gòu)建組織工程心臟瓣膜作用研究 目的：通過對(duì)TGF-β1基因轉(zhuǎn)染大鼠肌成纖維細(xì)胞，使后者自分泌TGF-β1，研究其在天然支架TEHV構(gòu)建中的作用。方法應(yīng)用脂質(zhì)體介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)染技術(shù)，將pcDNA3.0/TGF-β1表達(dá)載體導(dǎo)入大鼠肌成纖維細(xì)胞，轉(zhuǎn)染48h后G418篩選3w，培養(yǎng)出穩(wěn)定表達(dá)TGF-β1蛋白的轉(zhuǎn)基因肌成纖維細(xì)胞。轉(zhuǎn)染后48h和4w采用SABC方法檢測(cè)TGF-β1蛋白表達(dá)。種植轉(zhuǎn)基因肌成纖維細(xì)胞于去細(xì)胞

4、豬主動(dòng)脈瓣葉為實(shí)驗(yàn)組A，種植未轉(zhuǎn)基因肌成纖維細(xì)胞于去細(xì)胞豬主動(dòng)脈瓣葉加TGF-β1(10ng/ml)培養(yǎng)為實(shí)驗(yàn)組B，種植未轉(zhuǎn)基因肌成纖維細(xì)胞于去細(xì)胞豬主動(dòng)脈瓣葉不加TGF-β1培養(yǎng)為對(duì)照組，構(gòu)建TEHV。HE染色和掃描電鏡觀察細(xì)胞增殖情況，羥脯氨酸含量、DNA含量、力學(xué)測(cè)試儀測(cè)定其最大負(fù)荷力。結(jié)果轉(zhuǎn)染48h和4w后肌成纖維細(xì)胞可以穩(wěn)定表達(dá)TGF-β1蛋白。實(shí)驗(yàn)組A分別較實(shí)驗(yàn)組B和對(duì)照組的細(xì)胞增殖旺盛，膠原分泌較多，力學(xué)性能增強(qiáng)。結(jié)論轉(zhuǎn)T