血管內皮生長因子在肝臟組織工程中的作用.pdf

1、肝臟組織工程研究始于二十世紀九十年代，它旨在構建可植入性肝臟，從而緩解肝臟器官來源的緊缺，是解決肝疾病的最佳途徑和方式。同其他組織工程一樣，肝臟組織工程研究主要集中在以下幾個方面：種子細胞，如骨髓源干細胞，肝卵圓細胞，原代肝細胞，胚胎肝細胞，肝細胞株等；支架材料，包括天然基質材料和合成高分子聚合物；生長因子和細胞因子，它們可促進細胞增殖，組織或血管的修復和再生；以及血管化問題等。其中血管重建是肝臟組織工程的重點和難點之一，大量研究表明，

2、原代肝細胞很難在體外大量增殖與傳代，同時肝細胞聚集體內部細胞容易死亡，此類狀況均與缺乏微血管及膽管系統(tǒng)有關。在肝再生過程中，由肝實質細胞分泌的血管內皮生長因子（vascular endothelial
　　 growth factor VEGF）是參與肝臟組織結構重建和血管形成的重要生長因子，實驗中通過檢測VEGF在大鼠肝再生過程中的經時變化，探討VEGF在肝再生中的重要作用。
　　 肝臟組織工程中生長因子的應用主要是在

3、培養(yǎng)體系中直接加入，另外也有文獻報道將生長因子與材料結合以固定化生長因子的形式使用。但由于生長因子半衰期短，這為研究工作增加了成本。隨著基因工程學和材料學的不斷融合發(fā)展，設計開發(fā)VEGF質?；蜓b載支架，實現在支架上培養(yǎng)細胞的同時完成基因轉染，使細胞持續(xù)自主地表達目的基因的研究工作具有很大的發(fā)展?jié)摿?。實驗中利用了陽離子多聚物聚乙烯亞胺（PEI），它可濃縮DNA形成納米級顆粒，作為基因釋放載體轉染真核細胞。通過考察PEI的細胞毒性，為進一

4、步進行基因裝載支架的構建奠定基礎。
　　 實驗方法：wistar雄性大鼠隨機分為正常對照組、假手術組和實驗組。實驗組大鼠被切除70％的肝臟，分別于術后不同時段取出肝臟。用免疫組織化學技術檢測肝組織中VEGF的表達變化，增殖細胞核抗原（PCNA）的變化，以及肝竇形成情況。同時選用分子量為25000，分枝狀的聚乙烯亞胺結合質?；騪-MSCV-VEGF165，通過MTT法和凝膠電泳阻滯實驗考察PEI的細胞毒性以及PEI和DNA的最佳

5、結合比例。
　　 實驗結果：正常肝組織中VEGF幾乎無表達；肝切除術（PH）后48小時VEGF表達量顯著增加，主要分布于門管區(qū)周圍；術后72小時VEGF的表達量達到高峰，幾乎遍及整個肝小葉；之后VEGF的表達量逐漸減少至正常水平。增殖細胞核抗原PCNA是反映細胞增殖狀態(tài)的一個重要指標，它定位于細胞核。免疫組化結果顯示，大鼠70％肝切除術后48小時肝細胞增殖數量達到高峰，肝竇內皮細胞稍慢于肝細胞的增殖，72小時增殖達到頂峰。肝切除

6、術后的一周內，竇狀隙的大小逐步變化，肝竇經歷了降解和重建的過程。同時，分子量為25000的聚乙烯亞胺PEI是一種毒性較低的基因轉染載體，體外二維肝原代細胞培養(yǎng)體系中PEI最大使用濃度約為40μg/ml，PEI和DNA最佳結合比例約為3/1。
　　 通過實驗了解了肝再生過程中大部分VEGF由肝細胞分泌，肝細胞增殖可增強VEGF的表達，進而促進內皮細胞的分裂增殖，成為誘導肝臟微結構構建的主要因素之一，顯示出VEGF在肝再生過程中具有