INOSINE對(duì)腦缺血再灌流后腦組織CyclinD1、CDK4表達(dá)的影響.pdf

1、目的:觀察大鼠局灶性腦缺血再灌流后細(xì)胞周期蛋白D1(CyclinD1)mRNA和周期蛋白依賴蛋白激酶4(CDK4)mRNA的表達(dá)與神經(jīng)細(xì)胞凋亡、神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞增生的關(guān)系以及INOSINE的干預(yù)作用,從細(xì)胞增殖角度探討INOSINE的神經(jīng)保護(hù)作用機(jī)制.方法:應(yīng)用線栓法建立大鼠大腦中動(dòng)脈阻塞(MCAO)再灌流模型,腹腔注射INOSINE注射液,應(yīng)用原位末端標(biāo)記(TUNEL)和原位雜交技術(shù)分別檢測(cè)大鼠腦缺血90min再灌流2h、6h、12h、1

2、d、2d、3d、7d和14d等不同時(shí)間點(diǎn)皮質(zhì)區(qū)和紋狀體區(qū)Cyclin D1 mRNA和CDK4 mRNA的表達(dá)與神經(jīng)細(xì)胞凋亡的變化.結(jié)果:(1)細(xì)胞凋亡:腦缺血再灌流2h后皮層區(qū)與紋狀體區(qū)即出現(xiàn)少量凋亡神經(jīng)細(xì)胞,隨著再灌流時(shí)間的延長(zhǎng)而增加,皮層區(qū)1d達(dá)高峰,紋狀體區(qū)2d達(dá)高峰,之后逐漸減少,至再灌流14d接近假手術(shù)組水平.INOSINE治療組凋亡神經(jīng)細(xì)胞表達(dá)減少,其中再灌流12h、1d、2d、3d、7d較對(duì)照組有顯著差異(P<0.05)

3、.(2)CyclinD1 mRNA表達(dá):腦缺血再灌流后皮層區(qū)與紋狀體區(qū)的缺血周圍區(qū)神經(jīng)元Cyclin D1mRNA的表達(dá)于2h逐漸出現(xiàn),皮層區(qū)12h達(dá)高峰,紋狀體區(qū)1d達(dá)高峰,以后逐漸下降;INOSINE治療組12h、1d、2d、3d、7d時(shí)間點(diǎn)Cyclin D1 mRNA在紋狀體區(qū)、皮層區(qū)的表達(dá)明顯減少,較對(duì)照組有顯著差別(P<0.05).(3)CDK4mRNA表達(dá):腦缺血再灌流后皮層區(qū)與紋狀體區(qū)的缺血周圍區(qū)神經(jīng)元CDK4 mRNA的

4、表達(dá)于6h逐漸增多,皮層區(qū)12h達(dá)高峰,紋狀體區(qū)1d達(dá)高峰,以后逐漸下降;INOSINE治療組12h、1d、2d、3d、7d時(shí)間點(diǎn)CDK4 mRNA在紋狀體區(qū)、皮層區(qū)的表達(dá)明顯減少,較對(duì)照組有顯著差別(P<0.05).相鄰切片可見神經(jīng)細(xì)胞Cyclin D1 mRNA、CDK4 mRNA的表達(dá)和凋亡細(xì)胞染色區(qū)域基本相同.(4)神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞增生:腦缺血再灌流14d時(shí)在增生的膠質(zhì)結(jié)節(jié)中CyclinD1 mRNA的表達(dá)再次增加,INOSINE治

5、療組14d時(shí)間點(diǎn)在增生的神經(jīng)膠質(zhì)結(jié)節(jié)中CyclinD1 mRNA的表達(dá)明顯增加,較對(duì)照組有顯著差別(P<0.05).結(jié)論:(1)腦缺血再灌流后皮層區(qū)較紋狀體區(qū)對(duì)缺血敏感,缺血周圍區(qū)神經(jīng)Ⅰ元的凋亡是一個(gè)動(dòng)態(tài)的演變過(guò)程.(2)腦缺血再灌流早期Cyclin D1 mRNA的異常表達(dá)時(shí)序先于CDK4 mRNA、凋亡細(xì)胞的出現(xiàn),其異常表達(dá)可能誘導(dǎo)了神經(jīng)元的凋亡.腦缺血再灌流后期增生的神經(jīng)膠質(zhì)結(jié)節(jié)中Cyclin D1 mRNA的異常表達(dá)可能與神經(jīng)再