缺氧條件下HIF-1α上調(diào)ABCG2表達并參與ABCG2介導的肺癌A549細胞系耐藥.pdf

1、目的：
　　肺癌是當前發(fā)病率和致死率最高的惡性腫瘤。MDR是導致肺癌患者化療失敗預后不佳的主要原因。有研究發(fā)現(xiàn)缺氧條件下HIF-1α和多種耐藥相關蛋白表達增高，可能介導了腫瘤MDR的發(fā)生。本課題旨在研究HIF-1α和ABCG2在肺癌中的表達和作用，為肺癌治療提供新的思路。
　　方法：
　　1．收集非小細胞肺癌病例60例，分別取癌組織、癌旁組織和正常肺組織，用免疫組化法檢測HIF-1α和ABCG2在癌組織和正常組織中的表

2、達。分析HIF-1α表達與患者病理類型、TNM分期、有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的相關性；分析HIF-1α和ABCG2表達相關性。
　　2．利用siRNA轉(zhuǎn)染A549細胞下調(diào)HIF-1α的表達，MTT法檢測下調(diào)HIF-1α后A549細胞對藥物耐受性變化。
　　3．Westernblot法檢測轉(zhuǎn)染后A549-siRNA-ABCG2和正常A549細胞中ABCG2的表達；Westernblot法檢測缺氧24小時后，A549細胞中HIF-1α和A

3、BCG2的蛋白表達水平；Westernblot法檢測了常氧和缺氧條件下A549細胞、不同缺氧時間段A549-siRNA-HIF-1α細胞中HIF-1α和ABCG2的表達情況；用siRNA轉(zhuǎn)染A549細胞下調(diào)ABCG2的表達，MTT法觀察siRNA-ABCG2的A549細胞對順鉑的耐藥性變化；MTT法比較常氧條件下A549細胞和缺氧下沉默ABCG2和未沉默ABCG2的A549細胞存活率。
　　結(jié)果：
　　1．免疫組化染色結(jié)果顯

4、示：HIF-1α免疫組化染色主要定位于胞核和胞漿，呈棕黃色或棕褐色染色，HIF-1α在癌組織中表達率為60％（36/60），在癌旁和正常組織中無表達；HIF-1α在鱗癌中的表達率為50.00％（14/28），在腺癌中的表達率為68.75％(22/32)，兩組之間無明顯差異（P>0.05）；HIF-1α在Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期中的表達率分別為25％（4/16），58.82％（10/17），81.48％(22/27)，患者TNM分期越晚，HIF-

5、1α表達率越高，具有顯著差異（p<0.05）；在無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者標本中表達率為25％（5/20），在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的標本中表達率為77.50％（31/40），淋巴結(jié)有轉(zhuǎn)移者HIF-1α的表達率增高，統(tǒng)計學分析表明兩組間有顯著差異（P<0.05）。ABCG2在60例非小細胞肺癌標本中表達率為63.33％（38/60），HIF-1α和ABCG2在非小細胞肺癌中的表達呈正相關性，具有顯著性差異(rs=0.581,P<0.05)。結(jié)果表明：HI

6、F-1α表達與病理類型無關，患者TNM分期越晚表達越高，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的表達更高。HIF-1α和ABCG2表達存在共定位，二者表達存在明顯正相關。
　　2．建立了A549-siRNA-HIF-1α，經(jīng)westernblot法檢測其HIF-1α蛋白表達明顯低于缺氧A549中的表達；MTT法檢測常氧和缺氧下A549對順鉑耐藥性，缺氧下細胞存活率高于常氧下；MTT法檢測缺氧下A549-siRNA-HIF-1α和A549細胞的敏感性，A54

7、9-siRNA-HIF-1α細胞存活率要明顯低于A549細胞存活率。說明缺氧條件下，HIF-1α可使A549細胞耐藥性增加，下調(diào)HIF-1α表達可增加對藥物的敏感性。
　　3．用siRNA-ABCG2轉(zhuǎn)染A549細胞下調(diào)ABCG2，經(jīng)westernblot法檢測A549-siRNA-ABCG2中ABCG2表達明顯降低；缺氧下，HIF-1α和ABCG2表達均較常氧下增高；westernblot法分別檢測了常氧和缺氧條件下A549細胞

8、、不同缺氧時間段A549-siRNA-HIF-1α細胞中HIF-1α和ABCG2的表達，結(jié)果缺氧條件下，在HIF-1α沉默的A549細胞中：HIF-1α表達降低，且隨缺氧時間延長而減低；ABCG2表達同時降低，同為時間依賴型。用MTT法觀察siRNA-ABCG2的A549細胞對順鉑的耐藥性變化，發(fā)現(xiàn)缺氧下siRNA-ABCG2后的A549細胞存活率要高于對照細胞；用MTT法比較常氧條件下A549細胞和缺氧下沉默ABCG2和未沉默ABCG

9、2的A549細胞存活率，結(jié)果未沉默ABCG2的存活率最高，沉默ABCG2的次之，常氧細胞存活率最低。結(jié)果表明：缺氧條件下HIF-1α可上調(diào)ABCG2蛋白水平的表達，HIF-1α通過上調(diào)ABCG2的表達參與ABCG2介導的A549細胞耐藥性。
　　結(jié)論：
　　1．HIF-1α和ABCG2在NSCLC中高表達，HIF-1α表達與患者TNM分期、有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關；HIF-1α和ABCG2在NSCLC中共定位表達，存在著明顯正相關