A549-ABCG2耐藥細(xì)胞系的建立和功能研究.pdf

1、目的：建立穩(wěn)定表達(dá)ABCG2蛋白的A549-ABCG2細(xì)胞系并觀察其生物學(xué)特性變化，為選擇敏感化療藥物及制定臨床治療方案提供研究基礎(chǔ)。方法：非小細(xì)胞肺癌組織標(biāo)本中提取總RNA，RT-PCR獲得ABCG2全序列基因后插入pcDNA3.1質(zhì)粒，轉(zhuǎn)染A549細(xì)胞系，用G418挑取克隆穩(wěn)定篩選并命名為A549-ABCG2細(xì)胞。RT-PCR及Westernblot鑒定克隆基因及蛋白表達(dá)。通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)，MTT法檢測(cè)ABCG2高表達(dá)細(xì)胞的藥物敏感性

2、，檢測(cè)ABCG2蛋白ATP激酶活性，分析其與耐藥之間的相關(guān)性。結(jié)果：RT-PC吸Westernblot顯示A549-ABCG2細(xì)胞目的基因和蛋白表達(dá)穩(wěn)定。經(jīng)流式細(xì)胞儀檢測(cè)后發(fā)現(xiàn)，A549凋亡細(xì)胞明顯多于A549-ABCG2細(xì)胞且使用多柔比星后Gl峰前出現(xiàn)明顯凋亡峰，細(xì)胞凋亡率為6.7％，使用羥基喜樹(shù)堿后A549-ABCG2細(xì)胞S期減少14.7％，Gl期增加了13.5％;A549細(xì)胞S期增加了18.9％，Gl期減少了18.5％。MTT實(shí)驗(yàn)