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文檔簡介
1、目的:觀察紅光照射人角質形成細胞株(HaCaT)后,細胞內活性氧(ROS)濃度的變化對細胞增殖活性的影響。
方法:建立人角質形成細胞體外培養(yǎng)模型,分別用0.082J/cm2(10S)、0.164J/cm2(20S)、0.245J/cm2(30S)、0.491J/cm2(60S)、1.472J/cm2(180S)、2.453J/cm2(300S)、4.91 J/cm2(600S)、9.81 J/cm2(1200S)8個不同能量密
2、度波長為633nm的紅光照射人角質形成細胞株(HaCaT),對照組不照光,DCFH-DA(活性氧檢測試劑盒)孵育1小時后用酶標儀分別于孵育后0h、0.5h、1h、2h測定熒光值,反映細胞內ROS的濃度變化;用相同的照射條件照射人角質形成細胞株,每8小時照射1次,照射6次48小時后 CCK-8(細胞增殖試劑)孵育4h,酶標儀進行熒光值測定,反映細胞增殖情況,根據(jù)細胞內由 DCFH-DA探針孵育后檢測的熒光結果,設計對照組、0.082J/c
3、m2(10S)組、0.491 J/cm2(60S)組、2.453J/cm2(300S)組、9.81 J/cm2(1200S)組、陽性探針檢測組6個組用紅色線粒體示蹤劑Mito-Tracker染色線粒體,同時每個組細胞內孵育活性氧探針,在共聚焦顯微鏡下觀察ROS的來源和線粒體的關系。
結果: DCFH-DA孵育1小時后0h,0.5h,1h,2h四個時相點測定熒光值,能量密度在4.91J/cm2及以下實驗組,熒光值均有不同程度的增
4、高,其中2.453 J/cm2能量密度組,1h時相點熒光值升高最明顯,和對照組相比,具有明顯的統(tǒng)計學意義,能量密度在4.91J/cm2以上的實驗組,熒光值升高呈下降趨勢,和對照組相比,沒有明顯的統(tǒng)計學意義。CCK-8孵育4小時后測定熒光值,4.91J/cm2以下實驗組熒光值增加明顯,其中2.453 J/cm2能量密度組最明顯,和對照組相比具有明顯的統(tǒng)計學意義,能量密度在4.91J/cm2以上的實驗組,熒光值降低,和對照組相比,沒有明顯的
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