活性氧對(duì)INS-1細(xì)胞PTENmRNA表達(dá)的影響研究.pdf

1、糖尿病是由于胰島素分泌缺陷和(或)胰島素作用缺陷所引起的以慢性高血糖為特征的代謝性疾病,并可導(dǎo)致多種臨床并發(fā)癥。近年來(lái)糖尿病發(fā)病率逐年升高,嚴(yán)重威脅患者的健康甚至生命,給社會(huì)和家庭造成沉重的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。目前尚無(wú)根治糖尿病的方法,因此,了解胰島素分泌機(jī)制及調(diào)節(jié)途徑對(duì)于尋找新的治療靶點(diǎn),改善胰島素分泌、治療糖尿病具有重要意義。
　　 近年來(lái),生理濃度的活性氧(ROS)作為細(xì)胞內(nèi)信號(hào)分子的作用已經(jīng)逐漸被人們所認(rèn)識(shí)。研究顯示,用高糖刺激分

2、離的大鼠胰腺和INS-1細(xì)胞時(shí),在胰島素升高的同時(shí)伴有細(xì)胞內(nèi)ROS的升高,并且低濃度ROS可模擬葡萄糖作用于胰島B細(xì)胞,刺激胰島素分泌。說(shuō)明ROS作為信號(hào)分子參與了葡萄糖刺激胰島素分泌(GSIS)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑。
　　 PTEN是蛋白酪氨酸磷酸酶(PTPs)家族的一員,它通過(guò)負(fù)向調(diào)控磷酯酰肌醇3-激酶(PI3K)-蛋白激酶B(AKT)信號(hào)通路,成為重要的腫瘤抑制因子,并調(diào)節(jié)多種細(xì)胞活動(dòng)。由于PTENCys124的Pka值比通常的

3、Cys低(約5.4),在中性條件下易被離子化,使PTEN中這一活躍的Cys124很容易被氧化,與Cys71形成二硫鍵導(dǎo)致可逆性失活。研究表明,在吞噬細(xì)胞和成纖維細(xì)胞,H2O2通過(guò)可逆性氧化PTEN而抑制其活性,從而解除PTEN對(duì)PI3K的抑制作用,促進(jìn)細(xì)胞內(nèi)磷脂酰肌醇3,4,5-三磷酸(PIP3)升高,進(jìn)一步調(diào)節(jié)細(xì)胞活動(dòng)。
　　 到目前為止,尚無(wú)關(guān)于ROS是否對(duì)胰島β細(xì)胞PTEN具有調(diào)節(jié)作用的報(bào)道,因此,本試驗(yàn)對(duì)在INS-1細(xì)胞

4、內(nèi),高糖刺激的ROS升高是否對(duì)PTEN mRNA表達(dá)有抑制作用作一研究如下:
　　 分別用不同濃度葡萄糖(0、3、7、11和20mmol/L)和H2O2(0、1、2、4、6和8umol/L)干預(yù)INS-1細(xì)胞(30min),通過(guò)ELISA方法檢測(cè)INS-1細(xì)胞分泌胰島素;通過(guò)DCFH-DA熒光法檢測(cè)細(xì)胞ROS;通過(guò)RT-PCR方法檢測(cè)INS-1細(xì)胞PTENmRNA的表達(dá)。
　　 結(jié)果顯示:隨著葡萄糖和H2O2濃度升高,細(xì)