308nm準(zhǔn)分子激光對角質(zhì)形成細(xì)胞影響的研究.pdf

1、背景：白癜風(fēng)是一種原發(fā)性的、局限性或泛發(fā)性的皮膚色素脫失癥。據(jù)估計，人群中至少有1-2％人患白癜風(fēng)。組織病理發(fā)現(xiàn)：黑素細(xì)胞部分或完全缺失，表皮基底層、真皮淺層T淋巴細(xì)胞浸潤。黑素細(xì)胞消失的潛在機(jī)制尚不清楚，有3種可能機(jī)制誘導(dǎo)白癜風(fēng)的發(fā)生：自身免疫、神經(jīng)體液因素、自身細(xì)胞毒性。 由于白癜風(fēng)發(fā)病機(jī)制不明，因此其治療效果不能使人滿意，目前的治療包括：局部用皮質(zhì)類故醇激素、光線療法(NB-UVB，UVB，UVA)、光化學(xué)療法(UVB+補(bǔ)

2、骨脂素)、黑素細(xì)胞移植及近兩年出現(xiàn)的308nm準(zhǔn)分子激光。據(jù)文獻(xiàn)報道，不管采用何種治療方法，白癜風(fēng)患者皮損區(qū)色素恢復(fù)最主要的原因是毛囊乳頭處的黑素細(xì)胞移行到表皮內(nèi)增殖分化，合成黑素，并轉(zhuǎn)運其至周圍的角質(zhì)形成細(xì)胞。 308nm準(zhǔn)分子激光屬于UVB紫外光(波長位于308nm±1nm)，被推測具有和UVA、UVB相似的生物學(xué)效應(yīng)和臨床效果。308nm準(zhǔn)分子激光在臨床上一經(jīng)用于白癜風(fēng)的治療，就顯示其療效好、見效快的優(yōu)點。進(jìn)兩年來已有多個

3、國家關(guān)于308-nm準(zhǔn)分子在治療白癜風(fēng)有效性、安全性的臨床研究報道。 308nm準(zhǔn)分子激光治療機(jī)制尚不明確，推測可能有以下幾個方面：(1)刺激黑素細(xì)胞增生，促進(jìn)黑素生成。(2)誘導(dǎo)皮損處病理性T淋巴細(xì)胞凋亡。因此，本課題根據(jù)以上這兩點推測分別進(jìn)行探討。 1.308nm準(zhǔn)分子激光對角質(zhì)形成細(xì)胞分泌細(xì)胞因子的影響 研究依據(jù)：①既往研究表明中波紫外線(UVB)可誘導(dǎo)角質(zhì)形成細(xì)胞(Humankeratinocyte，HK

4、C)分泌多種細(xì)胞因子，如干細(xì)胞生長因子(SCF)、成纖維細(xì)胞生長因子(basicfibroblastgrowthfactor，bFGF)、神經(jīng)生長因子(nervegrowthfactor，NGF)、內(nèi)皮素(Endothelin-1，ET)、集落細(xì)胞生長因子(granulocyte-macrophagecolony-stimulating，GM-CSF)等，而這些細(xì)胞因子能產(chǎn)生某些生物學(xué)效應(yīng)，如誘導(dǎo)黑素細(xì)胞移行、增殖、分化及促進(jìn)黑素合成。

5、②308nm準(zhǔn)分子激光的照射能量主要集中于表皮，只有大約20％的射線能到達(dá)真皮，即大部分能量集中于表皮。 基于以上兩點，因此提出假設(shè)：308nm準(zhǔn)分子激光刺激角質(zhì)形成細(xì)胞(KC)合成分泌細(xì)胞因子(SCF、GM-CSF、bFGF)，而這些角質(zhì)形成細(xì)胞源性的細(xì)胞因子(部分KC源性的細(xì)胞因子已被證實)刺激無色素毛囊黑素細(xì)胞的移行、增殖、分化和黑素形成?；谶@一假設(shè)，本課題擬研究308nm準(zhǔn)分子對角質(zhì)形成細(xì)胞的作用。 目的：探討

6、308nm準(zhǔn)分子激光對角質(zhì)形成細(xì)胞(HKC)增殖及分泌細(xì)胞因子的影響。 方法：用CCK-8法檢測不同劑量308nm準(zhǔn)分子激光照射人角質(zhì)形成細(xì)胞(HKC)后12及24小時對細(xì)胞增殖的影響；不同劑量的308nm準(zhǔn)分子激光照射HKC后12及24小時ELISA檢測角質(zhì)形成細(xì)胞培養(yǎng)上清液中的干細(xì)胞生長因子(SCF)、集落細(xì)胞生長因子(GM-CSF)、成纖維細(xì)胞生長因子(bFGF)的濃度變化。 結(jié)果：角質(zhì)形成細(xì)胞活力與照射劑量呈負(fù)相

7、關(guān)，不同劑量照射對角質(zhì)形成細(xì)胞的活力影響差異有顯著性意義(F=30.672，P=0.000)，3個不同時間點間差異有顯著性意義(F=206.134，P=0.000)。不同照射劑量對角質(zhì)形成細(xì)胞分泌SCF的影響差異有顯著性意義(P=0.014，F(xiàn)=6.033)，5個不同時間點間差異無顯著性(F=0.966，P=0.054)；不同照射劑量對角質(zhì)形成細(xì)胞分泌GM-CSF的影響差異無顯著性意義(P=0.225，F(xiàn)=2.249)。5個不同時間點間

8、差異無顯著性(F=7.294，P=0.052)；不同照射劑量對角質(zhì)形成細(xì)胞分泌bFGF的影響差異有顯著性意義(P=0.018，F(xiàn)=11.889)，5個不同時間點間差異無顯著性(F=49.105，P=0.001)。 2.308nm準(zhǔn)分子激光誘導(dǎo)T淋巴細(xì)胞凋亡的作用研究 研究依據(jù)：①既往研究發(fā)現(xiàn)中波紫外線(UVB)能誘導(dǎo)人T淋巴細(xì)胞調(diào)亡。②T淋巴細(xì)胞是308nm準(zhǔn)分子激光治療的靶細(xì)胞。③局部轉(zhuǎn)移生長因子(TGF-β1)是一種

9、表皮細(xì)胞增殖的負(fù)調(diào)節(jié)TGF-β1能誘導(dǎo)多種細(xì)胞發(fā)生凋亡。UVB照射后，TGF-β1水平升高，TGF-β1具有免疫調(diào)節(jié)作用，提示UVB誘導(dǎo)局部TGF-β1水平升高，從而抑制了局部免疫和炎癥反應(yīng)，促進(jìn)局部色素恢復(fù)。 目的：探討308nm準(zhǔn)分子激光對T淋巴細(xì)胞的直接和間接誘導(dǎo)凋亡作用及轉(zhuǎn)化生長因子β1(TGF-β1)在誘導(dǎo)T淋巴細(xì)胞凋亡中的作用。 方法：ELISA檢測308nm準(zhǔn)分子激光照射KC前及照射后12、24及48hHK

10、C分泌TGF-β1的濃度變化；308nm準(zhǔn)分子激光照射體外分離的活動期白癜風(fēng)患者外周血T淋巴細(xì)胞，流式細(xì)胞儀檢測照射后48小時T淋巴細(xì)胞凋亡情況；建立transwell細(xì)胞共培養(yǎng)系統(tǒng)(角質(zhì)形成細(xì)胞位于上室，T淋巴細(xì)胞位于下室)，照射前加入不同濃度的抗TGF-β1抗體(25、250、2500pg/ml)，308nm準(zhǔn)分子激光照射transwell上室，照射后48小時檢測T淋巴細(xì)胞凋亡。 結(jié)果：流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示：308nm準(zhǔn)分子激

11、光可直接誘導(dǎo)T淋巴細(xì)胞凋亡；308nm準(zhǔn)分子激光照射trariswell上室可間接誘導(dǎo)T淋巴細(xì)胞凋亡。308nm準(zhǔn)分子激光誘導(dǎo)角質(zhì)形成細(xì)胞分泌TGF-β1的增加呈劑量依賴性；照射前加入抗TGF-β1抗體，可抑制準(zhǔn)分子激光的誘導(dǎo)凋亡作用。 3.結(jié)論： ①308nm通過照射表皮的角質(zhì)形成細(xì)胞，使角質(zhì)形成細(xì)胞分泌SCF、GM-CSF、bFGF等具有促使黑素細(xì)胞增殖、分化及黑素合成的細(xì)胞因子，通過以上的細(xì)胞因子間接作用于黑素細(xì)胞