提高破傷風類毒素免疫原性的初步研究.pdf

1、破傷風梭菌產(chǎn)生的破傷風毒素，經(jīng)0.4％甲醛滅活后，失去毒性而仍保留抗原性稱之為破傷風類毒素。類毒素精制后，可作為疫苗對人和動物進行免疫接種。但機體感染后不能獲得終身免疫力，且此免疫程序較長。為了減輕接種的副反應，提高免疫效果，減少注射次數(shù)，提高接種覆蓋率，本研究采用原核細胞表達具有高免疫原性的重組C蛋白，用于生產(chǎn)疫苗及免疫接種，以避免出現(xiàn)副作用；另外，用雙功能交聯(lián)劑戊二醛聚合破傷風毒素，使毒素分子之間進行交聯(lián)，從而產(chǎn)生分子量較大的，表面

2、決定簇多的聚合類毒素。該類毒素作為免疫的抗原，可以誘發(fā)較高的抗體水平，加強免疫記憶，延長保護機體免受破傷風的侵害的時間。 1.利用PCR技術(shù)從破傷風梭菌基因組DNA中擴增出1356bp的破傷風毒素C基因，將該基因片段插入到表達載體pET32a(+)中，轉(zhuǎn)化宿主菌BL21(DE3)中，用IPTG誘導表達，觀察各種條件下對重組菌蛋白表達的影響。對重組后蛋白用Ni-NAT親和層析的技術(shù)純化C融合蛋白，然后進行小鼠免疫實驗并測定效價。研

3、究顯示：經(jīng)SDS-PAGE分析，重組破傷風毒素C蛋白(rTTC)的表達量占可溶性蛋白的28.19％，純化后得到蛋白純度為96.92％。免疫印跡證實該重組蛋白是破傷風毒素C蛋白抗原，對小鼠免疫，三免后14drTTC組小鼠抗體效價仍能達到1∶16000。所獲得的重組蛋白具有良好的免疫原性。 2.經(jīng)過厭氧培養(yǎng)的破傷風梭菌，產(chǎn)毒后進行脫毒、精制，在產(chǎn)毒期間進行毒力鑒定、解毒和毒性逆轉(zhuǎn)實驗。再由戊二醛聚合破傷風類毒素，經(jīng)不同的聚合條件的優(yōu)

4、化，進行分子量和Lf的測定，然后免疫小鼠和兔子，并測定其免疫效價。培養(yǎng)的毒素可以作為制備類毒素使用，脫毒精制后的類毒素，經(jīng)毒力鑒定試驗、解毒試驗和毒性逆轉(zhuǎn)試驗檢測后均合格。用pH7.2的PBS稀釋類毒素，終濃度為0.1％、0.3％戊二醛置于室溫中聚合稀釋后的類毒素12h，聚合類毒素中聚合的類毒素分子量為600ku，含量占聚合物的43.82％，經(jīng)ELISA檢測抗原性，抗原與陽性血清呈陽性反應。免疫小鼠和兔子，平均效價在1∶20000～1∶