DEHP對新生雄性仔鼠胚胎Leydig cell的毒性作用及機制探討.pdf

1、目的： 觀察鄰苯二甲酸二乙基己基酯(DEHP)對新生雄性仔鼠生長發(fā)育的影響。探討DEHP對胚胎Leydig cell毒性作用的機制。 方法： 體重在220g-280g之間的雌性SD大鼠48只，隨機均分成四組：對照組(n=12)，低劑量組(n=12)，中劑量組(n=12)和高劑量組(n=12)。后三組大鼠自然受孕后第12天開始至分娩(孕第21天)給予大鼠不同劑量的玉米油和DEHP混合物0.5ml/d灌胃：每只實際灌

2、DEHP量為低劑量組DEHP10mg/kg/d、中劑量組DEHP100mg/kg/d和高劑量組DEHP750mg/kg/d；對照組同時灌予玉米油0.5ml/d。自然分娩后(生后1天，PND1)每組各取6窩雄性仔鼠處死并取血及睪丸組織。其余母鼠自然分娩后繼續(xù)灌胃直至仔鼠斷奶(生后21天，PND21)后處死各雄性仔鼠，并取血及睪丸組織。仔鼠均由母鼠母乳喂養(yǎng)。測量各組母鼠體重，孕鼠出生的仔鼠數(shù)及斷乳時仔鼠的存活率，PND1、PND21雄仔鼠體

3、重，睪丸重量，肛生殖器距離(AGD)及雌雄比例，用化學(xué)發(fā)光法檢測各雄仔鼠血清睪酮(T)水平。取睪丸組織常規(guī)固定，光鏡(LM)、透射電鏡(TEM)觀察PND1睪丸胚胎間質(zhì)細胞(FLC)形態(tài)學(xué)改變；免疫組化法(IHC)檢測FLC的促黃體生成素受體(LHR)和類固醇激素合成急性調(diào)節(jié)蛋白(StAR)的蛋白表達水平；實時定量PCR(Real-time PCR)方法檢測睪丸FLC的胰島素樣生長因子1(IGF-Ⅰ)、StAR的mRNA的相對表達量(△

4、△CT法)。 結(jié)果： 1.DEHP對孕鼠的生產(chǎn)率、平均每只孕鼠出生的仔鼠數(shù)、雌雄比例及至斷乳時仔鼠存活率的影響，各組間均無顯著性差異(P>0.05)。PND1雄仔鼠中低、中、高實驗組雄仔鼠體重呈下降趨勢，其中中、高劑量組雄仔鼠的體重下降明顯，分別與對照組和低劑量組相比較均有顯著性差異(P<0.01)；中、高劑量組睪丸重量呈下降趨勢，其中高劑量組睪丸重量下降明顯，與對照組相比較有顯著性差異(P<0.05)；中、高劑量組雄仔

5、鼠的AGD均有不同程度縮短，與對照組和低劑量組相比縮短均有顯著性差異(P<0.01)。PND21雄仔鼠中低、中、高劑量組雄仔鼠體重呈下降趨勢，其中中、高劑量組雄仔鼠的體重下降明顯，分別與對照組和低劑量組相比均有顯著性差異(P<0.01)，且高劑量組與中劑量組比較下降更明顯(P<0.05)；各實驗組睪丸重量與對照組相比較均有下降，其中高劑量組睪丸重量下降明顯，與對照組相比有顯著性差異(P<0.01)；低、中、高劑量組雄仔鼠AGD均有縮短，

6、各實驗組間比較縮短均有顯著性差異(P均<0.01)，其中中、高劑量組雄仔鼠的AGD縮短更明顯，分別與對照組比較有顯著性差異(P<0.01)，而且高劑量組比中劑量組縮短更顯著(P<0.01)。 2.血清T水平檢測結(jié)果 PND1雄仔鼠中低劑量組血清T水平升高，與對照組、中、高劑量組比較有顯著性差異(P<0.01)；而中、高劑量組血清T水平下降，與對照組比較有顯著性差異(P<0.05)。PND21雄仔鼠中低劑量組血清T水平升

7、高，與對照組、中、高劑量組比較升高均有顯著性差異(P<0.01)；而中、高劑量組血清T水平下降，其中高劑量組下降明顯，與對照組比較有顯著性差異(P<0.05)。 3.睪丸FLC的形態(tài)學(xué)觀察 光鏡下見對照組仔鼠睪丸FLC呈橢圓形，胞漿嗜酸性，圍繞血管或曲細精管散在分布。低劑量組可見間質(zhì)細胞聚集呈簇分布。中劑量組與高劑量組均可見間質(zhì)細胞呈瘤樣增生。電鏡示對照組間質(zhì)細胞橢圓形，胞漿內(nèi)可見脂質(zhì)顆粒、線粒體，滑面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)。低劑量組間

8、質(zhì)細胞橢圓形、長梭形，脂質(zhì)顆粒減少，線粒體、滑面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)豐富。中、高劑量組間質(zhì)細胞呈梭形或橢圓形，大小不一，核大、圓，胞漿豐富，細胞聚集一起，胞質(zhì)內(nèi)可見豐富的脂質(zhì)顆粒，脂質(zhì)顆粒染色深，滑面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)及線粒體擴張。 4.睪丸FLC的StAR及IGF-ⅠmRNA表達水平 PND1雄仔鼠各實驗組睪丸FLC的StARmRNA的相對含量均有不同程度下降，其中高劑量組下降明顯，與對照組比較有顯著性差異(P<0.01)。PND1雄仔鼠中低

9、、中劑量組睪丸FLC的IGF-ⅠmRNA相對含量升高，以低劑量組升高更為明顯，與對照組相比有顯著性差異(P<0.01)；而高劑量組睪丸FLC的IGF-ImRNA相對含量下降，與對照組比較卻無顯著性差異(P>0.05)。 5.睪丸FLC的LHR、StAR免疫組化結(jié)果 對照組仔鼠睪丸FLC的胞漿LHR表達強陽性；而在各處理組中表達減弱，其中中、高劑量組睪丸FLC的LHR表達減弱明顯，與對照組比較有顯著性差異(P<0.01)；

10、對照組仔鼠睪丸FLC的胞漿StAR表達強陽性；而在各處理組中表達減弱，其中高劑量組睪丸FLC的StAR表達減弱明顯，與對照組比較有顯著性差異(P<0.01)。 結(jié)論： 1.DEHP對宮內(nèi)胎鼠及哺乳期仔鼠的體重增長和睪丸及AGD的發(fā)育有不同程度的抑制作用，以高劑量組為重。 2.DEHP對新生雄性仔鼠睪丸FLC有毒性作用，可影響雄性仔鼠睪丸FLC的形態(tài)學(xué)及其生成類固醇的能力。其可能機制是低劑量DEHP宮內(nèi)暴露后，促進