蛋白A色譜介質(zhì)的抗體吸附行為及配基穩(wěn)定性研究.pdf

1、蛋白A(Staphylococcal protein A，SpA)色譜已成為抗體藥物制備的重大關鍵技術之一，深入認知SpA配基與抗體分子間相互作用是開發(fā)高效SpA色譜技術的重要前提。本文以SpA分子中參與抗體結(jié)合的突變抗體結(jié)合域Z為研究出發(fā)點，分別構(gòu)建了結(jié)合域Z單體及四串體重組蛋白SpA4Z。上述分子偶聯(lián)于Sepharose CL-6B基質(zhì)制得親和介質(zhì)Z-Sepharose及SpA4Z-Sepharose?？贵w吸附平衡表明，抗體與上述兩

2、種色譜介質(zhì)均具有較高的結(jié)合常數(shù)且SpA4Z親和性高于單一Z結(jié)合域。在此基礎上，本文利用等溫滴定微量熱儀(Isothermal titration calorimeter，ITC)研究了抗體在Z-Sepharose和SpA4Z-Sepharose色譜介質(zhì)上結(jié)合過程的量熱學變化并對游離的結(jié)合域Z單體和SpA4Z與抗體結(jié)合進行了比較，解析了焓變（△H）與熵變(△S)對抗體結(jié)合的貢獻。結(jié)果顯示，固定化配基導致結(jié)合常數(shù)降低。配基與抗體結(jié)合過程是由

3、AH驅(qū)動的。氫氧化鈉是最常用的色譜在位清洗試劑，針對天然蛋白A對氫氧化鈉堿性環(huán)境耐受性較差的問題，本文構(gòu)建了突變型重組蛋白SpA4mz。本文使用微量差示掃描微量熱儀(Differential scanning calorimeter，DSC)檢測了SpA4z和SpA4mz的穩(wěn)定性，結(jié)合色譜實驗表明同樣經(jīng)NaOH處理，SpA4mz比SpA4z具有更強的穩(wěn)定性。本文的研究工作有助于深化SpA配基與抗體的結(jié)合機制，為開發(fā)高效耐用的蛋白A色譜介