基于轉(zhuǎn)錄組比較探究茶樹對茶尺蠖抗性分子機制.pdf

1、茶尺蠖（Ectropis oblique）是茶樹（Camellia sinensis）上危害嚴重的?；院οx，常造成中國南方茶區(qū)茶葉生產(chǎn)上重大損失，對茶尺蠖抗性分子育種受到各產(chǎn)茶國重視。對抗蟲分子機制的研究是育成抗蟲良種的基礎，茶樹抗蟲反應由茶尺蠖取食產(chǎn)生的兩個誘發(fā)因子誘導:機械損傷和口腔分泌物刺激。本研究以對機械損傷、茶尺蠖危害和未處理葉片樣本轉(zhuǎn)錄組測序為手段，以不同轉(zhuǎn)錄組間多樣化比較為策略，以qRT-PCR技術作驗證，探求茶樹對茶尺

2、蠖抗性分子機制;并以此挖掘出核苷酸結合位點-亮氨酸重復(nucleotide binding site-leucine-rich repeat，NBS-LRR)類抗性序列CsNBSs9條，設計特異性引物通過qRT-PCR技術探究CsNBS1和CsNBS2基因在不同抗性品種茶尺蠖危害后的表達變化，并分別比較兩個基因在強弱抗品種間表達差異。主要研究結果如下:
　　1.利用轉(zhuǎn)錄組測序(RNA-sequencing，RNA-Seq)技術對

3、機械損傷、茶尺蠖危害以及未處理葉片進行轉(zhuǎn)錄組測序，策略性組間比較后生物信息學分析差異表達基因，qRT-PCR驗證與RNA-seq結果相符。從65548個unigene中挖掘出2995個僅由茶尺蠖口腔分泌物誘導的抗性基因，并顯著富集在植物激素信號轉(zhuǎn)導通路上，揭示出茉莉酸(jasmonic acid，JA)和乙烯(ethylene，ET)合成及響應基因過表達提高對茶尺蠖的抗性，并發(fā)現(xiàn)油菜素內(nèi)酯類(brassinosteroids，BRs)合

4、成及其激活的信號級聯(lián)相關基因上調(diào)也應對茶尺蠖侵害。
　　2.注釋蛋白功能為NBS-LRR類基因通過BLASTX比對NCBI數(shù)據(jù)庫，并以ConservedDomains軟件檢測保守結構域篩選得9個NBS-LRR類抗性unigene，分別命名為CsNBS1-9。編碼的氨基酸序列生物信息學分析表明，軟件SMART、MEME和COLIS預測到CsNBSs蛋白均具有NBS-LRR類蛋白家族典型的NBS結構域，其它結構域排列差異較大，結構域蛋

5、白長度不一;構建系統(tǒng)發(fā)育樹表明CsNBSs可能分為TNL(TIR-NBS-LRR)和non-TNL(non-TIR-NBS-LRR)兩大類，其中CsNBS1和CsNBS2分別歸為TNL亞家族和non-TNL類CNL亞家族。
　　3.利用qRT-PCR技術對不同抗性品種取食后不同時間點CsNBS1和CsNBS2表達分析得出，強抗品種CsNBS2表達上升而CsNBS1表達下降，而弱抗品種兩基因表達調(diào)控模式相反;研究CsNBS1和CsN