茶尺蠖和灰茶尺蠖體內(nèi)EoNPV增殖動態(tài)及Hemolin基因克隆與表達分析.pdf

1、茶尺蠖(Ectropis obliqua Prout)和灰茶尺蠖（Ectropis grisescens Warren）是我國茶園的主要食葉型害蟲。茶尺蠖核型多角體病毒(Ectropis obliqua Nuclear Polyhedrosis Virus，EoNPV)是茶尺蠖的主要病原微生物，目前已登記為病毒類微生物農(nóng)藥。近年來田間使用時發(fā)現(xiàn)EoNPV不僅可以感染茶尺蠖而且對其近緣種灰茶尺蠖也具有一定的致病力。為明確EoNPV對茶尺蠖

2、與灰茶尺蠖致病力的差異及其產(chǎn)生原因。本研究以茶尺蠖和灰茶尺蠖作為研究對象，測定了EoNPV感染后茶尺蠖和灰茶尺蠖體內(nèi)病毒增殖動態(tài)，構(gòu)建了茶尺蠖感染EoNPV和正常對照的中腸轉(zhuǎn)錄組，分析了茶尺蠖和灰茶尺蠖EoNPV感染后類免疫球蛋白基因的表達水平，以期揭示EoNPV對茶尺蠖和灰茶尺蠖致病力差異的免疫互作機理。主要研究結(jié)果如下:
　　1茶尺蠖和灰茶尺蠖幼蟲體內(nèi)病毒增殖動態(tài)結(jié)果顯示:病毒感染12小時后茶尺蠖和灰茶尺蠖體內(nèi)的病毒相對拷貝數(shù)

3、就差生了明顯差異，至病毒感染96小時后茶尺蠖幼蟲體內(nèi)病毒相對拷貝數(shù)接近灰茶尺蠖的14倍，中腸組織病毒相對拷貝數(shù)接近灰茶尺蠖的8倍，說明EoNPV能夠成功感染茶尺蠖和灰茶尺蠖，但灰茶尺蠖體內(nèi)的增殖速度明顯低于茶尺蠖，也就是說EoNPV對灰茶尺蠖的致病力明顯低于茶尺蠖。
　　2茶尺蠖感染EoNPV前后中腸轉(zhuǎn)錄組結(jié)果顯示:通過Illumina HiSeqTM2000高通量測序和Trinity軟件拼接后，共獲得平均長度為717bp的uni

4、gene25869條，其中有13733條unigene成功注釋到Nr、Nt、Pfam、KOG、Swiss-Prot、KEGG和GO數(shù)據(jù)庫，占總數(shù)的53.1％; GO分類結(jié)果顯示9246條unigene被分到GO三大類的55個節(jié)點，其中43條unigene與免疫系統(tǒng)過程(immunesystem process)有關(guān)，占總量的0.47％; KOG分類結(jié)果顯示通用功能(General function predictiononly)的uni

5、gene數(shù)最多為1278條，信號轉(zhuǎn)導(dǎo)機制(Signal transduction mechanisms)和防御機制(Defense mechanisms)中的部分unigene可能參與昆蟲對病毒的免疫代謝;KEGG分析獲得198條unigene參與免疫系統(tǒng)(Immune system);比較EoNPV感染前后unigene表達量，共獲得差異基因133條，其中上調(diào)基因80條，下調(diào)基因53條。
　　3.類免疫球蛋白基因（Hemolin

6、）克隆和表達分析結(jié)果顯示:茶尺蠖類免疫球蛋白基因全長1772bp，（GenBank登錄號:KM885983），包含1239 bp的開放閱讀框，編碼412個氨基酸;灰茶尺蠖類免疫球蛋白的ORF與茶尺蠖類免疫球蛋白ORF序列相似度達99％，預(yù)測蛋白分子量大小分別為45.8 kD和45.5kD，等電點(pI)分別為8.297和8.265，兩者都屬于典型的分泌型蛋白，具有昆蟲Hemolin基因保守的4個Ig功能區(qū)和2個N-glycosylati