QX型雞傳染性支氣管炎弱毒苗的制備及其安全性與免疫效力初步評價.pdf

1、雞傳染性支氣管炎（Infectious bronchitis，IB）是由雞傳染性支氣管炎病毒(Infectiousbronchitis virus，IBV)引起的一類急性、高度接觸傳染性疾病。弱毒活疫苗主要用于該病的防御，但常用IB疫苗已不能對流行株提供有效的免疫保護，開展能對流行毒株提供有效保護的弱毒疫苗的研究勢在必行。
　　本試驗所用毒株SDZB0808是在山東某雞場商品肉雞中分離得到。對SDZB0808全基因組測序和遺傳演化

2、分析表明該毒株屬目前我國主要流行株;交叉中和實驗結(jié)果表明該毒株抗原譜較廣，產(chǎn)生的抗體能和多種血清型抗原發(fā)生交叉中和反應(yīng)，適合作為候選疫苗毒株。SDZB0808在SPF雞胚被連續(xù)傳代致弱，本研究對獲得不同代次的子代病毒進行致弱效果分析，P100和P110均有良好的保護效果。
　　對SDZB0808毒株和P100進行全基因序列分析:從P62開始，以后的每個代次都在3244-3273位點連續(xù)性缺失30個核苷酸，導(dǎo)致ORF1a編碼的蛋白在

3、906-915位缺失10個氨基酸。根據(jù)傳代前后基因型的缺失差異，設(shè)計特異性引物，沒有氨基酸缺失的基因組命名為QD基因組，缺失氨基酸的基因組為RD基因組;利用SYBR GreenⅠ實時熒光定量檢測方法對P60、P100和P110存在的不同基因組進行定量分析。研究結(jié)果表明兩種基因組在不同代次中存在的比例不同，且呈逐步下降的趨勢。SDZB0808毒力致弱可能與其基因組序缺失10個氨基酸有關(guān)，在雞胚上傳代致弱的機理可能是雞胚對弱毒基因的定向選擇

4、性篩選的結(jié)果。具體的定向篩選弱毒基因機制還有待進一步研究。
　　本研究對初步篩選的P100進行疫苗相關(guān)的初步評價，P100以105.5EID50點眼、滴鼻免疫3日齡SPF雞后，試驗雞與對照組均精神良好，無明顯臨床癥狀和病理變化，氣管和腎臟組織也無病理組織學(xué)損傷，發(fā)病率與死亡率均為0％，表明P100對雛雞無致病性，具有良好的安全性。P100以104.5EID50點眼、滴鼻免疫SPF雞，2周后用同源強毒SDZB0808和異源強毒SDI

5、B821/2012分別攻毒，攻毒劑量106.0EID50。結(jié)果表明:P100免疫過的雞對強毒的攻擊具有100％的臨床保護。P100在雞體內(nèi)連續(xù)傳代5代，每個代次的試驗雞均無臨床特征出現(xiàn)，精神良好，收集各個代次的病料進行RT-PCR檢測，結(jié)果為陽性，接種10 dSPF雞胚，雞胚出現(xiàn)明顯的病理變化，這表明P100具有良好的穩(wěn)定性，雞胚傳代后毒力無返強。
　　綜上所述，初步評價P100對雞安全性良好，免疫效力合格，并且毒力穩(wěn)定，可以作為