菊酯降解菌的篩選及降解酶基因的克隆.pdf

1、　　本文從農(nóng)藥廠的污泥中篩選到7株能降解菊酯類農(nóng)藥的細菌，并選取了一株降解效能高的菌株J-2作為本論文的研究對象。通過對降解菌株J-2生理生化的研究和16SrDNA分子鑒定，初步鑒定該菌株為Klebsiellasp.根據(jù)目前的文獻來看，這是降解菊酯農(nóng)藥的一個新種。菌株J-2能以菊酯為唯一碳源進行生長。該菌株降解菊酯的最適溫度是35℃，最佳pH是7.0。除此以外，還研究了其它外界環(huán)境條件對菌株Klebsiellasp.J-2的生長和降解效

2、能的影響。菌株J-2產(chǎn)生的菊酯降解酶為胞內(nèi)酶，該降解酶的最適反應(yīng)條件是：溫度45℃，pH是6.5。以氯氰菊酯為底物，在一定條件下粗酶的米氏動力常數(shù)是：Km=10.25μM，Vmax=114.94μM/min。通過構(gòu)建該菌株的基因組文庫，我們從該文庫中篩選到了含該降解酶基因的3.6kbHindⅢ片段。該片段含有一個編碼637個氨基酸的開放讀碼框。DNA序列分析表明：該開放讀碼框與Salmonellaentericasubsp.eteric

3、aerovarCholeraesuis的預(yù)測蛋白hypotheticalproteinSC171(登錄號：AAS76447.1)有88％一致性?！　¤b于本文篩選的菊酯類農(nóng)藥降解菌J-2具有較廣泛的生長溫度和pH適宜范圍、廣泛的底物降解譜以及對多種金屬離子都有比較好的耐受性。因此該菌株的開發(fā)利用可以用來解決因菊酯類農(nóng)藥引起的環(huán)境污染問題。由于該降解酶基因在NCBI上比對結(jié)果僅與細菌的一些預(yù)測蛋白有同源性，到目前為止尚未見有菊酯類農(nóng)藥降解