甲胺磷降解菌的篩選及有機(jī)磷農(nóng)藥降解酶基因的克隆與表達(dá).pdf

1、有機(jī)磷農(nóng)藥作為一類高效廣譜的殺蟲(chóng)劑自上世紀(jì)40年代發(fā)明以來(lái)，已在全世界范圍內(nèi)大量生產(chǎn)并大面積使用。有機(jī)磷農(nóng)藥大大提高了農(nóng)作物的產(chǎn)量，是農(nóng)業(yè)豐收的保證，為人類社會(huì)的發(fā)展做出了重要的貢獻(xiàn)。但隨著其長(zhǎng)期和大范圍使用，越來(lái)越多的環(huán)境、人類健康和可持續(xù)發(fā)展問(wèn)題日益凸顯出來(lái)，已引起社會(huì)的廣泛關(guān)注。如何有效消除土壤及瓜果、蔬菜等食品中的農(nóng)藥殘留，已成為人類亟待解決的重要問(wèn)題。微生物修復(fù)作為農(nóng)藥降解的主要方式之一，具有其他降解方式無(wú)可比擬的優(yōu)勢(shì)。

2、>　　 本研究主要包括兩大方面：
　　 (1)甲胺磷降解菌的分離篩選與鑒定。分別利用甲胺磷作為唯一碳源和唯一氮源的培養(yǎng)方法，從山東某農(nóng)藥廠活性污泥中篩選分離出12株甲胺磷降解菌，采用氣相質(zhì)譜法測(cè)定各菌株的降解效能，從中選取降解效果較好的4號(hào)菌(MAPD-4)和10號(hào)菌(MAPD-10)作進(jìn)一步研究。分別對(duì)兩個(gè)菌株16S rDNA進(jìn)行測(cè)序和序列比對(duì)，結(jié)果顯示MAPD-4與葡萄球菌屬(Staphylococcus)的同源性為97％

3、，MAPD-10與產(chǎn)堿菌屬(Alcaligens)的同源性為99％。MAPD-4和MAPD-10的最適生長(zhǎng)溫度均為30℃，最適pH分別為7.0和6.0。在甲胺磷為唯一碳源的無(wú)機(jī)鹽培養(yǎng)基中(甲胺磷終濃度為100mg/L)培養(yǎng)15天，測(cè)得MAPD-4和MAPD-10的降解率分別為64％和49％。
　　 (2)有機(jī)磷農(nóng)藥降解酶基因的克隆與表達(dá)。從山東某農(nóng)藥廠采集活性污泥，利用土壤DNA提取技術(shù)從中提取DNA，根據(jù)有機(jī)磷農(nóng)藥降解酶基因設(shè)