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文檔簡介
1、利用微生物對有機(jī)磷農(nóng)藥的降解性能消除其在環(huán)境中的殘留,是治理環(huán)境污染的一項有效手段。甲基對硫磷(methylparathion,以下簡稱MP)又稱甲基1605,是一類目前廣泛使用的高毒有機(jī)磷農(nóng)藥,其主要中間代謝產(chǎn)物為對硝基苯酚(p-nitrophenol,以下簡稱PNP),易溶于水,具有中等毒性。由于二者都具有苯環(huán)結(jié)構(gòu),殘留期很長,給人類健康造成潛在威脅。本文從華陽農(nóng)藥廠污水處理曝氣池中分離,篩選到了多株能降解甲基對硫磷的菌株。其中菌株
2、Yw12,Yw15,Yw18,Yw28具有較好的降解性能。 Yw12能以甲基對硫磷為唯一碳源,磷源,對硝基苯酚為唯一碳源生長,經(jīng)鑒定,為根癌農(nóng)桿菌(Agrobacterium tumfaciens)。Yw15,Yw18,Yw28,能以甲基對硫磷和對硝基苯酚為唯一碳源生長,經(jīng)鑒定,為蒼白桿菌(Ochzobactetum sp.)四株菌的16S rDNA序列在GetIbank中的注冊號分別為DQ468100,DQ468101,DQ4
3、68102和DQ468103。并對四株菌進(jìn)行了系統(tǒng)發(fā)育分析。 分別用氣相色譜法和分光光度法對四株菌的降解性能進(jìn)行了研究,結(jié)果表明四株菌在0.5小時內(nèi)對50mg/L甲基對硫磷的降解率達(dá)90%以上;在8小時內(nèi)能將50mg/L對硝基苯酚完全降解。四株菌也同時能夠在以甲胺磷,辛硫磷,毒死蜱,克百威,溴氰菊酯,阿特拉津為唯一碳源的基礎(chǔ)培養(yǎng)液中生長,表明四株菌具有廣泛的農(nóng)藥降解譜。 用多種方法提取四株野生型菌的質(zhì)粒,只有用堿法大量提
4、取時發(fā)現(xiàn)有比其基因組大的條帶出現(xiàn),根據(jù)國內(nèi)外報道有的野生型菌株的質(zhì)粒大于其基因組,推測Yw15,Yw218,Yw28三株菌中可能存在大質(zhì)粒,但用紫外線,電穿孔,變溫SDS等質(zhì)粒消除的方法均沒消除掉,可能條件有待于改進(jìn)。 以四株菌基因組為模板,用PCR法克隆其水解酶基因mpd。將克隆到的菌株Yw12,Yw15,Yw18,Yw28的mpd基因進(jìn)行測序,其結(jié)構(gòu)基因全長為998bp,999bp,998bp,999bp?;蜃蕴柗謩e為:
5、DQ843605,DQ843606,DQ843607,DQ843608。測序結(jié)果在Genebank nucleic-nucleic Blast進(jìn)行比對,發(fā)現(xiàn)它們與其它甲基對硫磷降解菌的mpd基因同源性高達(dá)99%,說明甲基對硫磷水解酶結(jié)構(gòu)基因mpd具有非常高的保守性,四株菌的mpd基因可能是甲基對硫磷水解酶基因的同源基因。四株菌全細(xì)胞粗酶液SDS-PAGE電泳表明,其甲基對硫磷降解酶在菌體中呈組成型表達(dá),且初步確定四株野生型菌株MPD水解
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