一種納米藥物對耐藥結(jié)核分枝桿菌的作用及機制研究.pdf

1、 目的：本研究將一種化合物及其三種同類物(A、B、C、D)制備成納米藥物A’、B’、C’、D’,探討其對耐藥結(jié)核分枝桿菌的作用及其機制。方法：(1)經(jīng)過四聯(lián)恒溫磁力攪拌器,將藥物A、B、C、D,制成納米藥物A'、B’、C’、D’；(2)采用酸羅氏藥敏培養(yǎng)基與結(jié)核基因芯片法共同鑒定結(jié)核分枝桿菌菌型,選取H37Rv敏感菌株和三株耐藥菌株(分別為耐異煙肼、利福平和耐多藥株)為實驗對象；(3)實驗分組：實驗組：組1納米藥物A’、B’、C’、D

2、’；組2藥物A、B、C、D；組3為組1、組2分別與異煙肼聯(lián)合；組4組1、組2分別與利福平聯(lián)合；實驗組1、組2、組3、組4分別與四種結(jié)核菌株作用。對照組： 陽性對照組,為異煙肼、利福平與四種結(jié)核菌株作用；陰性對照組,為四株結(jié)核分枝桿菌菌液組；空白對照組,為米氏7H9培養(yǎng)液；(4)采用四甲基偶氮唑鹽(MTT)法,觀察納米藥物A’、B’、C’、D’和藥物A、B、C、D單用以及分別與異煙肼、利福平聯(lián)用對四種結(jié)核菌株的作用；(5)通過基因芯片技術(shù)

3、,檢測納米藥物C’與耐藥結(jié)核菌株作用前后耐藥位點熒光值的變化。結(jié)果：(1)納米藥物A’、B’、C’、D’,藥物A、B、C、D單用對四種結(jié)核菌株均無抑制作用；(2)單用異煙肼、利福平對耐異煙肼株、耐利福平株和耐多藥株無抑制作用,對H37Rv敏感株有抑制作用；(3)納米藥物A’、B’、C’、D’和藥物A、B、C、D分別與異煙肼、利福平聯(lián)用對四種結(jié)核菌株均有抑制作用；同時,實驗結(jié)果顯示對耐藥菌株的抑制作用隨著藥物劑量的增加呈現(xiàn)遞增趨勢,而且耐

4、藥菌株對不同藥物的劑量依賴程度有所不同；(4)與陽性對照組比較,實驗組3、實驗組4耐藥菌株的耐藥指數(shù)均有明顯下降(p=0)；納米藥物A’、B’、C’、D’與異煙肼、利福平聯(lián)用的耐藥指數(shù)比藥物A、B、C、D與異煙肼、利福平聯(lián)用的耐藥指數(shù)下降更明顯(p<0.01),不同耐藥菌株耐藥指數(shù)下降的程度也有不同；(5)在納米藥物B’作用后,耐藥菌株的耐藥位點無改變,但其耐藥位點的基因表達比用藥前有所下降,其中：耐異煙肼株的katG基因表達下降47.

5、5%；耐利福平株的rpoB基因表達下降了97.3%；耐多藥株的katG基因表達下降了14.7%,rpoB基因表達下降了60.1%。結(jié)論：(1)納米藥物A’、B’、C’、D’和藥物A、B、C、D對耐藥結(jié)核桿菌無抑制作用；(2)納米藥物A’、B’、C’、D’和藥物A、B、C、D分別與異煙肼、利福平聯(lián)用對耐藥結(jié)核桿菌有抑制作用,并于藥物劑量正相關(guān)；前者抑菌作用更強；(3)納米藥物A’、B’、C’、D’和藥物A、B、C、D可能通過下調(diào)耐藥結(jié)核桿