牙菌斑及胃粘膜幽門螺桿菌耐藥基因檢測(cè)的臨床價(jià)值.pdf

1、目的： 本實(shí)驗(yàn)通過(guò)胃粘膜取材建立等位基因特異性引物一聚合酶鏈反應(yīng)法(ASP-PCR)檢測(cè)H．pylori23S rRNA基因2142及2143位置上SNPs，進(jìn)而獲知H．pylori的突變耐藥情況；建立巢式PCR方法檢測(cè)牙菌斑中H．pylori的感染及其23SrRNA基因突變情況。 方法： 1、采集2006年6月至2006年11月因上消化道癥狀行胃鏡檢查的患者83例，其中包括16例慢性胃炎、60例潰瘍和7例胃癌患

2、者，男性49例，平均年齡為47歲。H．pylori的診斷依據(jù)快速尿素酶試驗(yàn)、組織學(xué)檢查及<'14>C呼氣試驗(yàn)，此三項(xiàng)中兩項(xiàng)陽(yáng)性為H．pylori陽(yáng)性患者，兩項(xiàng)陰性為H．pylori陰性患者。83例患者(65例H．pylori陽(yáng)性，18例H．pylori陰性)的胃粘膜提取DNA，均經(jīng)過(guò)ASP-PCR和巢式PCR兩種方法擴(kuò)增，巢式PCR產(chǎn)物經(jīng)BsaI和BbsI進(jìn)行酶切。采用SPSSl2．0軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，兩種方法陽(yáng)性率的比較采用x <'

3、2>檢驗(yàn)。 2、收集<'14>C呼氣試驗(yàn)和快速尿素酶試驗(yàn)均為H．pylori陽(yáng)性的患者45例，包括慢性淺表性胃炎23例，十二指腸潰瘍22例。取其牙菌斑，提取DNA，用巢式PCR方法擴(kuò)增H．pylori23S rRNA的425bp片段，陽(yáng)性結(jié)果用限制性內(nèi)切酶BsaI和BbsI進(jìn)行酶切。 結(jié)果： 1、采用ASP-PCR法65例H．pylori陽(yáng)性患者58例為野生株，1例發(fā)生A2143G突變，6例為野生株與A2143

4、G突變株的混合株。所有突變株均經(jīng)測(cè)序證實(shí)。突變率10.8％，準(zhǔn)確性100％。巢式PCR法擴(kuò)增65例H．pylori陽(yáng)性患者56例為陽(yáng)性，18例H．pylori陰性患者17例為陰性。對(duì)57例巢式PCR陽(yáng)性產(chǎn)物進(jìn)行限制性酶切分析，有7例被Bsa I切開，表明存在A2143G的突變，無(wú)一例被Bbs I識(shí)別。所有突變株均經(jīng)測(cè)序證實(shí)。 2、45例H．pylori陽(yáng)性患者25例牙菌斑在第一輪PCR擴(kuò)增出了H．pylori 23S rRNA

5、617bp的片斷，(陽(yáng)性擴(kuò)增率為55．6％)，而28例在第二輪PCR擴(kuò)增出了425bp的片段(陽(yáng)性擴(kuò)增率為62.2％)。對(duì)28例巢式PCR陽(yáng)性產(chǎn)物進(jìn)行限制性酶切分析，有1例被Bsa I切開，表明存在A2143G的突變，無(wú)一例被Bbs I識(shí)別。所有突變株均經(jīng)測(cè)序證實(shí)。 結(jié)論： 1、采用ASP-PCR方法可以簡(jiǎn)便的檢測(cè)到胃粘膜中H．pylori23S rRNA的SNPs(2142、2143位置上腺嘌呤突變?yōu)轼B嘌呤)，不需要酶