FISH技術檢測多發(fā)性骨髓瘤的分子細胞遺傳學異常.pdf

1、目的： 1．檢測分子細胞遺傳學改變1q21擴增、p53、RB1、D13S319缺失，以及IgH重排在多發(fā)性骨髓瘤患者中的發(fā)生率，以及攜帶這遺傳學異常的細胞的比例。 2．研究上述5種分子細胞遺傳學改變與多發(fā)性骨髓瘤免疫分型的關系。 3．分析這5種分子細胞遺傳學改變之間的相關性。 4．探討上述5種分子細胞遺傳學改變在多發(fā)性骨髓瘤發(fā)病機制中的作用。 5．分析上述5種分子細胞遺傳學改變與多發(fā)性骨髓瘤患者預

2、后的關系。 材料與方法： 1．研究對象：2004年1月至2008年9月20例初治MM患者，男14，女6例，中位年齡54．5歲，平均年齡56．4歲。診斷參照張之南主編的《血液病診斷與療效標準》。20例患者根據M蛋白類型分為：IgGλ型5例，IgGκ型7例，IgAλ型4例，IgAκ型1例，IgDλ型1例，雙克?。↖gGκ、IgGλ）型1例，λ輕鏈型1例。根據ISS分期：Ⅰ期3例、Ⅱ期12例、Ⅲ期5例。對照組選用同期8例非血液

3、系統(tǒng)惡性疾病患者的染色體標本。 2．探針：針對1q21基因的Rhodamine標記的序列特異性DNA探針，針對p53基因的FITC標記的序列特異性DNA探針，和針對RB1基因的FITC標記的序列特異性DNA探針，針對13q14．3的Rhodamine標記的序列特異性DNA探針，針對IgH重排的FITC、Rhodamine標記的序列特異性DNA探針，上述5種探針由金菩嘉公司提供。 3．無菌條件下取治療前患者及正常對照骨髓，

4、直接法及短期培養(yǎng)法制備染色體標本。 4．應用前述5種探針，以FISH技術檢測20例初治MM患者和8例非血液系統(tǒng)惡性疾病患者的染色體標本。 5．數(shù)據分析采用SPSS軟件。 結果： 1．20例患者中，檢測到8例患者1q21擴增（40％），陽性細胞比例中位數(shù)30％；5例RB1基因缺失（25％），陽性細胞比例中位數(shù)40％；5例D13S319缺失（25％），陽性細胞比例中位數(shù)40％；2例p53基因缺失（10％），陽

5、性細胞比例中位數(shù)21．5％；9例IgH重排（45％），陽性細胞比例中位數(shù)20％。上述5種分子細胞遺傳學異常與國際上其他研究組大規(guī)模研究得到的檢測率無統(tǒng)計學差別（p>0．05）。 2．8例1q21擴增陽性患者的免疫分型包括IgG型4例，IgGλ/IgGκ雙克隆型1例：IgA型2例，IgD型1例；5例RB1基因陽性患者的免疫分型全部為IgG型；5例D13S319缺失陽性患者的免疫分型全部為IgG型；2例p53均為IgA型：9例IgH

6、重排患者的免疫分型包括IgG型5例，IgA型4例。 3．ISS分期：8例1q21擴增陽性患者中，5例屬于Ⅲ期，3例屬于Ⅱ期；5例RB1、D13S319缺失MM患者中有2例屬于Ⅲ期，3例屬于Ⅱ期；2例p53缺失MM患者ISS分期均為Ⅲ期；9例IgH重排患者中，5例屬于Ⅲ期，3例屬于Ⅱ期，1例屬于Ⅰ期。 4．5例RB1缺失患者同時攜帶D13S319缺失，即5例患者都是RB1、D13S319同時缺失；2例P53缺失MM患者同時

7、顯示1q21擴增陽性、IgH重排陽性，即P53缺失、1q21擴增和IgH重排三重陽性。 結論： 1．1q21擴增、RB1基因缺失、D13S319缺失、p53基因缺失、IgH重排是多發(fā)性骨髓瘤的常見分子細胞遺傳學改變，本研究檢測到的5種分子細胞遺傳學異常與國際上其他研究組大規(guī)模研究得到的檢測率無統(tǒng)計學差別。 2．RB1缺失與D13S319缺失兩種異常共存。 3．p53缺失MM患者同時顯示1q21擴增陽性、I