臭牡丹提取液對氣道高反應(yīng)疾病模型的藥理作用的初步研究.pdf

1、氣道高反應(yīng)是一種常見的臨床表現(xiàn)，主要見于支氣管哮喘，慢性阻塞性肺疾病、病毒性上呼吸道感染等急慢性呼吸道疾病。現(xiàn)一般認為氣道高反應(yīng)的發(fā)病機制是氣道炎癥，故藥物治療手段主要是從抗炎和對癥治療兩個方向進行防治，雖然這些藥物可以治療或緩解氣道高反應(yīng)，但不能解決病情反復(fù)發(fā)作和阻斷氣道結(jié)構(gòu)重塑與肺功能衰退進程等問題。臭牡丹在傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)中廣泛用于治療癰疽，疔瘡，乳腺炎，關(guān)節(jié)炎，濕疹，頭痛，牙痛等癥，近年來也有報道臭牡丹提取液具有對抗遲發(fā)性超敏反應(yīng)和細胞

2、免疫的抑制作用以及緩解關(guān)節(jié)炎、腎炎、瘧疾、鎮(zhèn)痛催眠、縮宮等作用。因此，臭牡丹有可能具有作為治療氣道高反應(yīng)性疾病藥物開發(fā)的潛在價值。 目的：研究臭牡丹作為潛在的治療氣道高反應(yīng)性疾病新藥的開發(fā)價值。 方法： 一、臭牡丹總提物的作用觀察 1.提取臭牡丹總的有效成分，做成口服制劑。 2.用臭氧應(yīng)激建立新型的氣道高反應(yīng)小鼠模型，方法如下：將小鼠置于40cm×30cm×25cm塑料箱內(nèi)，2.0ppm臭氧與新鮮

3、空氣混合導(dǎo)入箱中，臭氧應(yīng)激5d，每天20min。 3.將實驗小鼠一共分為5組：正常對照組、藥物對照組、模型組、藥物治療組和激素治療組。 4.通過測量小鼠氣道反應(yīng)性、支氣管肺灌洗液(BALF)中的白細胞計數(shù)與分類、外周血中的白細胞計數(shù)與分類、BALF上清液中的乳酸脫氫酶的含量，觀察肺臟病理切片氣道與肺組織的病變程度來評價藥物治療效果；觀察小鼠肝、腎組織的病理切片及外周血的白細胞計數(shù)來初步評估臭牡丹藥物的毒性作用。

4、5.通過血清藥理學(xué)方法觀察臭牡丹含藥血清對永生化支氣管上皮細胞株的增殖作用。 二、臭牡丹活性成分的作用觀察 1.分離提取臭牡丹的三種活性成分，即A類、B類和C類，并做其成分的預(yù)試檢查；然后做成三種口服制劑。 2.在臭氧應(yīng)激氣道高反應(yīng)小鼠模型上(建模方法同上)，用三種含不同臭牡丹活性成分的口服制劑給模型小鼠灌胃治療。 3.將實驗小鼠一共分為5組：正常對照組、模型組、A類治療組、B類治療組和C類治療組。

5、 4.通過測量小鼠氣道反應(yīng)性、支氣管肺灌洗液(BALF)中的白細胞計數(shù)、外周血中的白細胞計數(shù)、BALF上清液中的總蛋白的含量，觀察肺病理切片的氣道與肺組織的病變程度來評價臭牡丹不同活性成分的治療效果。 結(jié)果： 一、臭牡丹總提物的治療作用效果 1.在不同濃度的乙酰甲膽堿激發(fā)狀態(tài)下模型組小鼠的氣道阻力(RL)比值均要明顯高于對應(yīng)的正常對照組小鼠的RL比值，說明造模成功。在不同濃度的乙酰甲膽堿激發(fā)狀態(tài)下臭牡丹藥物治療

6、組小鼠的RL比值均要明顯低于對應(yīng)的模型組小鼠的RL比值，療效達到激素治療組水平。 2.模型組小鼠的BALF中白細胞計數(shù)大于正常對照組的BALF中自細胞數(shù)目，藥物治療組小于模型組。白細胞分類觀察發(fā)現(xiàn)，模型組小鼠BALF內(nèi)增高的白細胞主要是粒細胞與淋巴細胞，藥物治療可降低粒細胞與淋巴細胞的數(shù)目。 3.模型組小鼠外周血白細胞總數(shù)增高，藥物治療組的白細胞總數(shù)少于模型組。外周血的白細胞分類計數(shù)顯示，模型組的中性粒細胞、淋巴細胞、單

7、核細胞和嗜酸性粒細胞數(shù)目均要高于對照組，藥物治療組的上述細胞數(shù)目均少于模型組。 4.從BALF中乳酸脫氫酶(LDH)含量的趨勢來看，模型組的LDH含量增高，藥物治療可以降低臭氧應(yīng)激引起的增高的LDH含量。 5.小鼠肺病理切片HE染色結(jié)果觀察(觀察指標包括上皮細胞脫落、管壁增厚、管壁平滑肌層增厚、管腔內(nèi)分泌物量、周圍血管及支氣管炎癥細胞滲出程度和肺泡結(jié)構(gòu)改變程度)，模型組的肺組織病理改變明顯，藥物治療可減輕肺病變程度。

8、 6.肝、腎的病理切片HE染色后各組小鼠的肝和腎結(jié)構(gòu)均未發(fā)現(xiàn)炎癥改變或損傷，提示臭牡丹總提物對肝、腎無明顯毒副作用。藥物對照組與正常對照組的外周血白細胞總數(shù)相比較差別無意義，提示臭牡丹提取液無白細胞抑制作用、無明顯全身性毒副作用。 7.MTT法觀察人支氣管上皮細胞生長曲線，稀釋二倍、一倍、未稀釋的三組含藥血清的活細胞數(shù)在接種后12h，36h，48h，3d，4d，5d六個時間點均要高于不含藥小鼠血清組，提示含藥血清可能具有促進

9、支氣管上皮細胞增殖的作用。 二、臭牡丹中不同活性成分的治療作用效果 1.在本輪實驗中，在不同濃度的乙酰甲膽堿激發(fā)狀態(tài)下模型組小鼠的氣道阻力(RL)比值均要明顯高于對應(yīng)的正常對照組小鼠的RL比值，說明造模成功。C類治療組與A類治療組在不同濃度的乙酰甲膽堿激發(fā)狀態(tài)下RL比值均要明顯低于模型組；B類治療組只有在0.78mg/ml的乙酰甲膽堿激發(fā)狀態(tài)下的RL比值明顯低于模型組，其它三種濃度的乙酰甲膽堿激發(fā)時的RL比值與模型組相比

10、無差異。 2.白細胞計數(shù)結(jié)果顯示，模型組小鼠的BALF中白細胞計數(shù)要高于正常對照組，C類治療組與A類治療組小鼠的BALF中白細胞計數(shù)要明顯低于模型組，B類治療組小鼠的BALF中白細胞計數(shù)與模型組相比無統(tǒng)計學(xué)意義。 3.模型組小鼠中外周血的總的白細胞數(shù)目大于正常對照組中外周血的白細胞數(shù)目，用藥的三組的白細胞數(shù)均要少于模型組。 4.BALF中的總蛋白含量可反映肺損傷程度。本次實驗中，模型組的總蛋白含量增加，C類治療組

11、蛋白含量明顯低于模型組。 5.小鼠肺病理切片HE染色觀察到，模型組小鼠有明顯的肺組織結(jié)構(gòu)改變，C類治療組和A類治療組的肺組織病變程度均要低于模型組，B類治療組與模型組相比較無統(tǒng)計學(xué)意義。 結(jié)論： 1.臭氧攻擊能引起小鼠發(fā)生氣道炎癥反應(yīng)、氣道高反應(yīng)和肺組織病理改變。臭牡丹總提物能夠減輕臭氧攻擊所造成氣道與肺泡病理改變，炎癥反應(yīng)及氣道高反應(yīng)。 2.含臭牡丹藥物的小鼠血清可能具有促進支氣管上皮細胞增殖的作用。