鹿茸口服液制備及其對小鼠免疫作用的研究.pdf

1、目的：采用傳統(tǒng)常規(guī)中藥提取方法浸漬法和回流法提取鹿茸有效生物成分，以粗提液中有效物質(zhì)浸出量為參考進(jìn)行提取方法的優(yōu)化篩選；以殼聚糖為澄清劑，制備鹿茸口服液，檢測口服液中氨基酸的含量，參照藥典中口服液各項指標(biāo)，初步建立鹿茸口服液的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；同時建立動物模型，觀察鹿茸口服液在動物臨床試驗中的免疫作用。 方法：(1)水醇結(jié)合為溶媒，采用浸漬和回流提取法對鹿茸中有效成分進(jìn)行充分提取，以時間、溶媒倍數(shù)、濃縮比例為影響因素，有效浸出物為評價依

2、據(jù)進(jìn)行方法的優(yōu)化篩選；茚三酮、雙縮脲反應(yīng)和薄層層析定性檢測提取液中蛋白質(zhì)、甘氨酸，采用考馬斯亮藍(lán)G250法測定鹿茸幾種提取液樣品中粗蛋白含量，并繪制蛋白質(zhì)含量標(biāo)準(zhǔn)曲線。(2)使用澄清劑吸附法除雜，常規(guī)方法制備鹿茸口服液，按照國家藥典2005年版合劑標(biāo)準(zhǔn)檢測各項指標(biāo)，試劑盒檢測口服液中蛋白質(zhì)含量，應(yīng)用氨基酸自動分析儀對口服液氨基酸含量進(jìn)行分析，并與粗提液中各項水解氨基酸含量進(jìn)行比較，以此為鹿茸口服液質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)提供依據(jù)。(3)用環(huán)磷酰胺復(fù)制免

3、疫抑制小鼠模型(50mg/kg)，測定脾臟重量和腹腔巨噬細(xì)胞吞噬功能，比色法測定血清溶血素(HCso)，MTT法檢測植物血凝素(PHA)和脂多糖(LPS)分別誘導(dǎo)的脾臟T、B淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能，從而研究鹿茸口服液對小鼠免疫功能的影響。 結(jié)果：(1)根據(jù)蛋白質(zhì)含量標(biāo)準(zhǔn)曲線測得兩種提取方法提取的粗蛋白含量分別為浸漬法：42.85μg/mL、41.16μg/ml；回流法：57.21 μg/ml、16.941μg/mL。據(jù)此得出結(jié)論，回流

4、提取方法具有反復(fù)提取性，鹿茸粗提物含量較高，但花費時問較長，消耗溶媒量較大；就本試驗研究方法而論，以75％乙醇作為溶媒，回流提取法所得粗提液有效物質(zhì)較高。(2)采用口服液常規(guī)制備方法、殼聚糖絮凝法改善澄清度制備而成的鹿茸口服液澄清度、穩(wěn)定性良好，質(zhì)量控制檢測符合2005年國家藥典合劑各項標(biāo)準(zhǔn)；采用氨基酸自動分析儀分析總氨基酸含量為15.63mg/100mL換算為提取液同比濃度后，氨基酸總含量為293.063mg/mL，與提取液含量47.

5、2mg/100mL，比較差異顯著p＜0.05)。(3)鹿茸口服液能夠增強正常小鼠體液免疫功能，并能大幅度恢復(fù)免疫抑制小鼠的體液免疫水平，在一定劑量上能夠提高小鼠細(xì)胞免疫功能，免疫抑制組小鼠灌服高劑量鹿茸口服液能夠增加脾指數(shù)(p＜0.05)，灌服0.1mL，鹿茸口服液則明顯提高了正常小鼠脾指數(shù)(p＜0.01)。灌服鹿茸口服液對小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬能力沒有明顯作用。 小結(jié)：提取優(yōu)化結(jié)果以75％乙醇作為溶媒，回流法提取的有效物質(zhì)中粗蛋