肝衰竭患者外周血單核細胞TOLL樣受體2、4基因表達的研究.pdf

1、肝衰竭是由多種因素引起的嚴重肝臟損害，患者容易引起敗血癥休克和多臟器功能衰竭，其作用機制復雜，其中各種炎性細胞因子在肝衰竭的發(fā)生發(fā)展中起到重要作用。目前對于炎性細胞因子如何導致肝衰竭的機制并不十分清楚。Toll樣受體(Toll-likereceptors，TLRs)作為新近免疫研究的熱點，在肝衰竭過程中的作用日益受到重視。 TLRs是一種重要的模式識別受體，主要表達于免疫細胞尤其是單核巨噬細胞和樹突狀細胞表面，與相應配體結合后可

2、以激活免疫細胞并促進免疫細胞分泌大量的炎性細胞因子和趨化因子，發(fā)揮機體的抗感染能力，構成機體免疫反應的第一道防線。最新研究表明，TLRs廣泛參與肝臟針對細菌和病毒防御的免疫反應，并在眾多的肝臟疾病如肝硬化、肝再生、肝臟缺血再灌注損傷、酒精性肝病、非酒精性脂肪肝、乙型肝炎和丙型肝炎病毒感染、原發(fā)性膽汁性肝硬化中發(fā)揮作用。但是，有關TLRs在肝衰竭中的作用機制并不清楚。研究與炎性細胞因子密切相關的Toll樣受體2、4在肝衰竭中的作用和表達，

3、將有助于了解肝衰竭的發(fā)病機制。 一、目的 研究肝衰竭患者外周血單核細胞Toll樣受體2、4基因的表達及其與細胞因子的關系，探討Toll樣受體2、4在肝衰竭中的作用。 二、方法 32例肝衰竭患者來自2007年6月1日至2007年12月30日浙江省臺州醫(yī)院感染科住院患者，均為乙型肝炎病毒感染。所有病例均排除近期感染以及合并其它慢性疾病者。32例均為慢加急性肝衰竭患者，其中，肝衰竭早期患者18例，中晚期患者14

4、例。另選20例健康獻血者為正常對照組，20例慢性乙肝患者為慢性乙肝組。采用Ficoll淋巴細胞分離液分離外周血單個核細胞，Trizol試劑抽提總RNA，反轉錄后進行PCR擴增，所得的產物經凝膠成像分析，獲取TLR2、4mRNA光密度值。采用酶聯(lián)免疫吸附試劑檢測外周血內毒素、TNF-α、IL-6水平，分析它們的變化及相互關系。采用SPSS13.0統(tǒng)計學軟件包分析和處理實驗結果數(shù)據(jù)。 三、結果 正常對照組、慢性乙肝組、肝衰竭

5、早期組和中晚期組血漿內毒素水平分別為0.05±0.01、0.11±0.04、0.21±0.08、0.30±0.11EU/ml，呈逐漸遞增趨勢，各組間比較差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。正常對照組、慢性乙肝組、肝衰竭早期組和中晚期組血清TNF-α水平分別為38.56±7.68、51.92±12.37、102.48±18.25、148.52±26.38pg/ml，TNF-α水平逐漸上升，各組間比較差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。正常對照

6、組、慢性乙肝組、肝衰竭早期組和中晚期組血清IL-6水平分別為7.09±1.15、13.24±3.75、19.58±5.36、24.62±9.27pg/ml，IL-6水平逐漸上升，各組間比較差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。正常對照組、慢性乙肝組、肝衰竭早期組和中晚期組外周血單核細胞TLR2mRNA水平分別為0.502±0.089、0.644±0.105、0.745±0.126、0.905±0.168，TLR2的表達逐漸增強，各組間比較差

7、異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。正常對照組、慢性乙肝組、肝衰竭早期組和中晚期組外周血單核細胞TLR4mRNA水平分別為0.512±0.092、0.685±0.135、0.946±0.176、0.826±0.156，肝衰竭早期組、中晚期組TLR4mRNA的表達要高于正常對照組(P＜0.01)，但相對于早期組，中晚期組TLR4mRNA的表達下降(P＜0.05)。 肝衰竭早期組和中晚期組患者外周血單核細胞TLR2mRNA表達與同組血T

8、NF-α水平有明顯相關性(分別r=0.865，P＜0.01:r=0.921，P＜0.01)，與同組血IL-6水平也有明顯相關性(分別r=0.762，P＜0.01；r=0.851，P＜0.01)。肝衰竭早期組患者外周血單核細胞TLR4mRNA表達與血TNF-α、IL-6水平有明顯相關性(分別r=0.917，P＜0.01；r=0.788，P＜0.01)，但在中晚期組與血TNF-α、IL-6水平無明顯相關性(分別r=0.253，P＞0.05；