WISP1參與哮喘氣道重塑機制的實驗研究.pdf

1、研究背景:
　　Wnt信號參與調(diào)控機體生長發(fā)育的諸多環(huán)節(jié)，其異?；罨梢詫?dǎo)致腫瘤、纖維增生和組織重塑等疾病的發(fā)生。Wnt誘導(dǎo)分泌蛋白1(WISP1)是Wnt信號通路的下游靶基因之一，WISP1高表達與器官損傷修復(fù)，以及心、肺、肝等臟器纖維化相關(guān)。此外，最近研究發(fā)現(xiàn)，WISP1基因多態(tài)性與哮喘患者肺功能改變密切相關(guān)。因此，我們推測WISP1在哮喘氣道重塑的發(fā)生和發(fā)展中扮演重要角色。
　　目的:
　　本研究通過構(gòu)建動物模型

2、評估WISP1與哮喘氣道重塑的關(guān)系，并通過體外實驗深入探討其具體作用及潛在機制。
　　方法:
　　通過霧化吸入卵清蛋白(OVA)構(gòu)建哮喘氣道重塑大鼠模型，PCR和免疫組化從基因轉(zhuǎn)錄水平和蛋白水平兩個方面評估WISP1表達情況，再用抗WISP1中和抗體對大鼠預(yù)處理，評估氣道重塑較前是否有所改善。為深入探討WISP1的具體作用及潛在機制，體外細胞實驗被進一步實施。重組人WISP1因子被用于刺激肺成纖維細胞，MTT法檢測細胞增殖情

3、況，Sircol Collagen Assay kit檢測膠原釋放情況，Western Blotting分析Akt、GSK-3β等通路活化情況。用SH-5阻斷Akt通路，進一步檢測肺成纖維細胞增殖、膠原釋放以及相關(guān)信號通路活化情況。
　　結(jié)果:
　　1.與對照組相比，哮喘氣道重塑動物模型肺組織中WISP1水平顯著上調(diào)(P＜0.05)。阻斷WISP1表達后可部分抑制OVA誘導(dǎo)的哮喘氣道重塑(P＜0.05);
　　2.在體

4、外WISP1可直接誘導(dǎo)肺成纖維細胞增殖，并呈時間依賴性（WISP1:3.47±0.15，48小時;8.17±0.15，72小時;對照組:2.50±0.15，48小時;5.07±0.25，72小時，P＜0.05）;
　　3.在體外WISP1可誘導(dǎo)肺成纖維細胞合成和分泌膠原蛋白(WISP1:18.4±3.1 ng/cell，對照組;5.4±1.0 ng/cell，P＜0.05)，并顯著上調(diào)p-Akt和p-GSK-3β水平(P＜0.05