WISP1參與哮喘氣道重塑機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、研究背景:
　　Wnt信號(hào)參與調(diào)控機(jī)體生長發(fā)育的諸多環(huán)節(jié)，其異常活化可以導(dǎo)致腫瘤、纖維增生和組織重塑等疾病的發(fā)生。Wnt誘導(dǎo)分泌蛋白1(WISP1)是Wnt信號(hào)通路的下游靶基因之一，WISP1高表達(dá)與器官損傷修復(fù)，以及心、肺、肝等臟器纖維化相關(guān)。此外，最近研究發(fā)現(xiàn)，WISP1基因多態(tài)性與哮喘患者肺功能改變密切相關(guān)。因此，我們推測(cè)WISP1在哮喘氣道重塑的發(fā)生和發(fā)展中扮演重要角色。
　　目的:
　　本研究通過構(gòu)建動(dòng)物模型

2、評(píng)估WISP1與哮喘氣道重塑的關(guān)系，并通過體外實(shí)驗(yàn)深入探討其具體作用及潛在機(jī)制。
　　方法:
　　通過霧化吸入卵清蛋白(OVA)構(gòu)建哮喘氣道重塑大鼠模型，PCR和免疫組化從基因轉(zhuǎn)錄水平和蛋白水平兩個(gè)方面評(píng)估WISP1表達(dá)情況，再用抗WISP1中和抗體對(duì)大鼠預(yù)處理，評(píng)估氣道重塑較前是否有所改善。為深入探討WISP1的具體作用及潛在機(jī)制，體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)被進(jìn)一步實(shí)施。重組人WISP1因子被用于刺激肺成纖維細(xì)胞，MTT法檢測(cè)細(xì)胞增殖情

3、況，Sircol Collagen Assay kit檢測(cè)膠原釋放情況，Western Blotting分析Akt、GSK-3β等通路活化情況。用SH-5阻斷Akt通路，進(jìn)一步檢測(cè)肺成纖維細(xì)胞增殖、膠原釋放以及相關(guān)信號(hào)通路活化情況。
　　結(jié)果:
　　1.與對(duì)照組相比，哮喘氣道重塑動(dòng)物模型肺組織中WISP1水平顯著上調(diào)(P＜0.05)。阻斷WISP1表達(dá)后可部分抑制OVA誘導(dǎo)的哮喘氣道重塑(P＜0.05);
　　2.在體

4、外WISP1可直接誘導(dǎo)肺成纖維細(xì)胞增殖，并呈時(shí)間依賴性（WISP1:3.47±0.15，48小時(shí);8.17±0.15，72小時(shí);對(duì)照組:2.50±0.15，48小時(shí);5.07±0.25，72小時(shí)，P＜0.05）;
　　3.在體外WISP1可誘導(dǎo)肺成纖維細(xì)胞合成和分泌膠原蛋白(WISP1:18.4±3.1 ng/cell，對(duì)照組;5.4±1.0 ng/cell，P＜0.05)，并顯著上調(diào)p-Akt和p-GSK-3β水平(P＜0.05