香煙煙霧對哮喘氣道炎癥與氣道重塑的影響和糖皮質(zhì)激素的干預(yù)作用的研究.pdf

1、目的:用卵清蛋白(OVA)法復(fù)制慢性哮喘小鼠模型，通過香煙煙霧暴露和吸入性糖皮質(zhì)激素(ICS)的干預(yù)，觀察小鼠氣道病理學特點及瘦素(Leptin)、磷酸化的信號調(diào)節(jié)激酶(P-ERK)的水平變化，探討香煙煙霧暴露對哮喘氣道炎癥與重塑的影響及ICS的干預(yù)作用。
　　方法:40只雄性小鼠隨機分為對照組（A組）、哮喘組（B組）、煙霧暴露組（C組）、布地奈德組（D組）及煙霧暴露布地奈德組（E組），每組8只。B組小鼠在第1、8、15天腹腔注射

2、抗原混合液0.2ml(含OVA20ug和氫氧化鋁2mg)。第21日開始超聲霧化吸入2.5％的OVA生理鹽水激發(fā)，隔日霧化1次，每次30min，持續(xù)至第52日，共計13次。C組在B組基礎(chǔ)上，自激發(fā)開始前1小時，每日給予小鼠煙霧暴露30min，共燃燒6支香煙;D組在B組基礎(chǔ)上，于每次激發(fā)前30min霧化吸入布地奈德1mg;E組在C組基礎(chǔ)上，于每次煙霧暴露后激發(fā)前霧化吸入布地奈德1mg;A組小鼠于第1、8、15天腹腔內(nèi)注射生理鹽水，第21日開

3、始用生理鹽水霧化，頻率和次數(shù)同前。于末次激發(fā)后6小時處死小鼠，結(jié)扎右肺，左肺行肺泡灌洗作細胞分類計數(shù)，取右肺組織行蘇木精-伊紅（HE）染色觀察肺組織病理學的改變及檢測氣道壁和氣道平滑肌厚度，Masson染色觀察氣道膠原沉積，免疫組化檢測Leptin及P-ERK的表達。RT-PCR檢測Leptin mRNA在肺組織中表達。
　　結(jié)果:(1)行為學改變:B及D組在激發(fā)時點頭運動、行動遲緩及懶動等呼吸困難等表現(xiàn);C及E組在煙霧暴露時，煩

4、躁不安、跳躍、口唇發(fā)紺，腹肌痙攣等呼吸困難等表現(xiàn)更加明顯。A組小鼠呼吸平穩(wěn)、反應(yīng)靈敏、無呼吸急促等表現(xiàn)。(2)肺泡灌洗液炎癥細胞檢測結(jié)果:B組炎癥細胞總數(shù)(28.08±1.78)、嗜酸性粒細胞數(shù)(4.17±0.15)及淋巴細胞數(shù)(17.87±0.54)較A組(10.9±0.72、0.88±0.17、3.38±0.32)增多，C組(39.19±2.54、13.72±0.74、20.94±0.83)較B組增多，D組(18.21±0.52、2

5、.17±0.21、14.34±0.55)較B組減少，E組(29.31±1.25、9.89±1.17、18.75±0.35)較C組減少，差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。(3)病理學特點:B組氣道周圍見大量的炎性細胞浸潤、氣道上皮細胞脫落、黏膜下水腫、氣道平滑肌增厚、管腔狹窄等病理改變;C組較B組更為明顯;D組炎癥浸潤較B組減少，E組炎癥浸潤較C組減少。對照組未見上述變化。肺組織病理學評分示:B組(4.0±0.28)較A組(0.3±0.

6、14)增多，C組(4.4±0.28)較B組增多，D組（3.2±0.10）較B組減少，E組(4.1±0.17)較C組減少，差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05）。(4)氣道壁及平滑肌厚度:B組氣道壁及平滑肌厚度(7.91±0.56、5.34±0.84)較A組(3.28±0.49、1.89±0.52)增高，C組(11.16±0.53、8.80±0.84)較B組增高，D組(7.18±0.72、4.22±0.98)較B組減低，E組(10.83±0.

7、54、8.08±0.53)較C組減低，差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。(5)氣道上皮下膠原沉積結(jié)果:Masson染色見，B組(5.23±0.55)較A組(1.58±0.09)增多，C組(6.53±0.68)較B組增多，D組(4.12±0.63)較B組減少，差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），E組(6.39±0.57)較C組減少，但差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。(6) Leptin及P-ERK表達:B組Leptin和P-ERK灰度

8、值(OD值)(1.81±0.04、1.77±0.16)高于A組(0.8±0.07、0.39±0.16)，C組(2.17±0.08、2.33±0.27)高于B組，D組(1.46±0.09、1.44±0.14)較B組減少，E組(1.90±0.11、2.09±0.36)較C組減少，差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。(7)Leptin mRNA結(jié)果:B組(5.12±1.73)高于A組(2.25±1.31)，差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，

9、C組(6.03±1.80)表達量高于B組，D組（4.36±0.45）較B組減少，E組(5.78±1.20)較C組減少，但差異不具有統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。(8)相關(guān)性分析:各組小鼠Leptin及P-ERK表達呈正相關(guān)(r=0.913，P＜0.05);氣道壁、平滑肌厚度及膠原沉積與Leptin及P-ERK表達量呈正相關(guān)，相關(guān)系數(shù)分別為Leptin(r=0.526;0.322;0.543, P＜0.05)及P-ERK(r=0.565;0