糖尿病腎病患者p66shc的表達(dá)及其與臨床表型的關(guān)系.pdf

1、研究背景:糖尿病腎病是糖尿病(Diabetes Mellitus，DM)最常見(jiàn)、最嚴(yán)重的微血管并發(fā)癥，是引起糖尿病患者死亡最主要的原因，在過(guò)去的10年中，糖尿病腎病的發(fā)生率增加了2倍，目前糖尿病腎病占終末期腎臟病(end stage renal diseases，ESRD)50％以上。雖然糖尿病腎病的發(fā)病機(jī)制至今未明，越來(lái)越多的研究表明高糖誘導(dǎo)的ROS的過(guò)量產(chǎn)生是DN的中心環(huán)節(jié)。傳統(tǒng)的觀念認(rèn)為DN的病理?yè)p害主要在腎小球，最新的研究發(fā)現(xiàn)，

2、腎小管間質(zhì)病變也是DN的早期和原始特征，并不繼發(fā)于腎小球的病變，并且是預(yù)測(cè)腎功能惡化的重要指標(biāo)。銜接蛋白p66Shc是調(diào)控氧化應(yīng)激和生命周期的關(guān)鍵蛋白，存在于線粒體膜間隙，在糖尿病狀態(tài)下，p66shc的表達(dá)上調(diào)，活化的p66shc明顯增加，氧化細(xì)胞色素C(CytC)，導(dǎo)致線粒體ROS過(guò)量產(chǎn)生，加重細(xì)胞的氧化損傷和凋亡。研究表明，第36位絲氨酸(Ser36)磷酸化在p66Shc活化的過(guò)程中是必需的。盡管目前大量體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)已發(fā)現(xiàn):STZ誘導(dǎo)

3、的糖尿病鼠腎臟p66Shc表達(dá)上調(diào)，敲除p66Shc基因可以減少STZ誘導(dǎo)的1型糖尿病腎病大鼠腎組織產(chǎn)生的氧化應(yīng)激，抑制NF-κβ的活性，降低AGE的形成，保護(hù)腎臟組織結(jié)構(gòu)和功能，改善腎組織病理變化，降低蛋白尿?；谝陨涎芯?，我們認(rèn)為p66shc在糖尿病腎病患者腎組織表達(dá)上調(diào)，可能與DN患者小管上皮細(xì)胞氧化損傷及細(xì)胞凋亡密切相關(guān)。為此，我們展開(kāi)如下實(shí)驗(yàn)。
　　 第一章銜接蛋白p66shc在糖尿病腎病患者外周血表達(dá)及其與臨床表型之

4、間關(guān)系
　　 目的;觀察糖尿病腎病患者外周血p66shc的表達(dá)，分析其與臨床表型的關(guān)系
　　 方法:隨機(jī)選取經(jīng)臨床確診為糖尿病腎病的患者30人及非糖尿病腎病患者（原發(fā)性腎?。?5人，正常對(duì)照組15人。采用real-time PCR檢測(cè)其外周血p66shc的表達(dá)。
　　 結(jié)果: real-time PCR結(jié)果顯示:與正常對(duì)照組相比，非DN輕微病變組患者外周血p66shc表達(dá)水平升高(P＜0.05);糖尿病腎病組與非

5、DN輕微病變組及對(duì)照組相比，p66shc表達(dá)明顯升高(P＜0.05)，統(tǒng)計(jì)學(xué)有顯著差異。相關(guān)分析發(fā)現(xiàn)p66shc的表達(dá)與糖尿病持續(xù)時(shí)間、甘油三酯及血糖水平密切相關(guān)。
　　 結(jié)論:糖尿病腎病患者外周血p66shc的表達(dá)上調(diào)
　　 第二章糖尿病腎病患者腎組織中p66shc的表達(dá)
　　 目的:觀察銜接蛋白p66shc在糖尿病腎病患者腎組織中的表達(dá)，初步探討P66shc的表達(dá)與糖尿病腎病氧化應(yīng)激損傷的關(guān)系
　　

6、方法:隨機(jī)選取經(jīng)臨床和腎臟病理確診為糖尿病腎病12人及輕微病變患者(原發(fā)性腎病)10人。采用PASM、Masson、PAS染色觀察腎臟普通病理改變;分別用免疫組化、免疫熒光檢測(cè)p66shc、p-p66shc及ROS表達(dá)變化
　　 結(jié)果:腎臟普通病理結(jié)果顯示:DN組患者腎小球系膜基質(zhì)中-重度增生，伴多個(gè)節(jié)段結(jié)節(jié)狀硬化，出現(xiàn)典型Kimmelstiel-Wilson結(jié)節(jié)，基底膜彌漫性增厚僵硬，腎間質(zhì)多灶性小管萎縮、間質(zhì)纖維化，伴大量炎

7、癥細(xì)胞浸潤(rùn)，部分小管代償性擴(kuò)張;對(duì)照組患者僅見(jiàn)系膜細(xì)胞及系膜基質(zhì)節(jié)段性輕度增生，部分腎小管上皮細(xì)胞空泡變性，腎間質(zhì)部分小灶性纖維化，伴少量淋巴單核細(xì)胞浸潤(rùn)，血管未見(jiàn)明顯異常，提示糖尿病腎病患者腎小管間質(zhì)損傷程度明顯高于對(duì)照組。免疫組化、免疫熒光顯示:p66shc主要表達(dá)對(duì)照組患者腎小管上皮細(xì)胞，腎小球系膜細(xì)胞僅少量表達(dá);與非DN輕微病變組相比，DN組患者腎小管上皮細(xì)胞p66shc表達(dá)明顯上調(diào)，腎小球系膜細(xì)胞表達(dá)輕度上調(diào)，同時(shí)腎間質(zhì)淋巴單