IL-18對(duì)HK-2細(xì)胞E-cadherin表達(dá)的影響及其細(xì)胞內(nèi)通路的研究.pdf

1、【目的】 腎小管上皮細(xì)胞一肌成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)分化(epithelial-mesenchymaltransdifferentiation，EMT)被認(rèn)為在腎間質(zhì)纖維化(renal interstitial fibrosis，RIF)發(fā)病過程中發(fā)揮重要作用。而EMT發(fā)生的首要條件是上皮黏附特性的喪失。上皮細(xì)胞鈣黏蛋白(E-cadherin)的主要功能是建立和維持正常細(xì)胞間的連接，以維護(hù)上皮的完整性。IL-18在多種腎臟病中存在表達(dá)或分泌

2、異?，F(xiàn)象；在體外IL-18可使人近端腎小管上皮細(xì)胞系(HK-2細(xì)胞)發(fā)生EMT。我們推測(cè)白細(xì)胞介素-18(imerleukin-18，IL-18)對(duì)HK-2細(xì)胞的作用可能部分通過影響E-cadherin表達(dá)而實(shí)現(xiàn)的。本研究通過檢測(cè)HK-2細(xì)胞在IL-18刺激下其E-cadherin表達(dá)是否變化，并通過觀察核因子(NF)-kB特異性抑制劑SN50對(duì)HK-2細(xì)胞E-cadherin表達(dá)的影響來探討其可能的細(xì)胞內(nèi)通路機(jī)制，以期在我們?cè)醒芯康?/p>

3、基礎(chǔ)上，在進(jìn)一步明確IL-18在慢性腎臟疾病(chronic renal kidney，CKD)發(fā)生、發(fā)展中的作用機(jī)制。 【方法】 應(yīng)用細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)培養(yǎng)HK-2細(xì)胞。采用不同濃度的IL-18及一定濃度的核因子(NF)-kB特異性抑制劑SN50(一種能抑制NF-kB復(fù)合體核轉(zhuǎn)位的可透過細(xì)胞膜的特異性多肽)作用于HK一2細(xì)胞。在不同的時(shí)間段，運(yùn)用免疫細(xì)胞化學(xué)法(ICC)檢測(cè)HK-2細(xì)胞E-cadherin的表達(dá)；采用逆轉(zhuǎn)錄-

4、聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)法檢測(cè)HK-2細(xì)胞E-cadherin mRNA的表達(dá)。 【結(jié)果】 1．IL-18減少E-cadherin陽(yáng)性的HK-2細(xì)胞百分?jǐn)?shù)0(對(duì)照)、1、10、100ng/mL的IL-18作用于HK-2細(xì)胞24h、48h和72h后，ICC檢測(cè)不同濃度的IL-18作用于HK-2細(xì)胞24h、48h和72h后，E-cadherin陽(yáng)性的HK-2細(xì)胞百分?jǐn)?shù)有明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。IL-18劑量和時(shí)間依賴性地減少E

5、-cadherin的表達(dá)。 2．IL-18減少HK-2細(xì)胞E-cadherin mRNA的表達(dá) 0(對(duì)照)、1、10、100ng/mL的IL-18作用于HK-2細(xì)胞24h、48h和72h后，RT-PCR檢測(cè)其對(duì)HK-2細(xì)胞表達(dá)E-cadherin mRNA的影響，結(jié)果示IL-18劑量和時(shí)間依賴性地減少E-cadherin mRNA的表達(dá)。 3．NF-kB特異性抑制劑SN50可以部分阻斷IL-18對(duì)HK-2細(xì)胞E-cadh