2023年全國(guó)碩士研究生考試考研英語(yǔ)一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁(yè)
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文檔簡(jiǎn)介

1、目的: 探討鉛是否誘導(dǎo)人腎近曲小管上皮細(xì)胞(HK-2)凋亡,并進(jìn)一步研究鉛誘導(dǎo)HK-2細(xì)胞凋亡的途徑,為預(yù)防和治療鉛性腎病提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)和理論基礎(chǔ)。 方法: 以不同濃度的鉛(0、50、100、200、400μmol/L)與HK-2細(xì)胞共培養(yǎng)48h作量效分析;以400μmol/L鉛與HK-2細(xì)胞共培養(yǎng)(0、12、24、48h)作時(shí)效分析;平板克隆實(shí)驗(yàn)法檢測(cè)細(xì)胞活力;Hochest33258熒光染色檢測(cè)細(xì)胞凋亡形態(tài)學(xué)改

2、變;Annexin—V(FITC)/PI雙染法結(jié)合流式細(xì)胞儀分析細(xì)胞凋亡率;熒光化學(xué)分光儀分析caspase—3、—8、—9(半胱天冬酶—3、—8、—9)的活性變化;流式細(xì)胞儀檢測(cè)檢測(cè)細(xì)胞色素c(Cytc)的釋放;Westernbolt檢測(cè)caspase—3、—9、bcl-2、bax蛋白的表達(dá)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果用SPSS13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。 結(jié)果: 1.平板克隆實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:鉛可抑制HK-2細(xì)胞生長(zhǎng)活力,隨著鉛濃度的增高及

3、染毒時(shí)間的延長(zhǎng),細(xì)胞生長(zhǎng)活力越低(p<0.05,p<0.01); 2.Hochest33258熒光染色觀察到鉛使HK-2細(xì)胞胞體縮小、胞漿濃縮、核染色質(zhì)聚集、核固縮、核碎裂等典型的凋亡形態(tài)學(xué)改變; 3.鉛呈劑量依賴(lài)性和時(shí)間依賴(lài)性誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。50、100、200、400μmol/L鉛染毒48h后,凋亡率分別為4.35%±1.08%、13.39%±0.53%、18.09%±2.54%、30.85%±0.93%,400μmo

4、l/L染毒12、24、48h后,凋亡率分別為5.36%±1.38%、14.38%±1.05%、31.08%±1.94%(p<0.05,p<0.01); 4.流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示.鉛誘導(dǎo)Cytc從線粒體釋放入胞漿,釋放量呈劑量依賴(lài)性和時(shí)間依賴(lài)性增高(p<0.05,p<0.01); 5.鉛使caspase—3、caspase—9的活性增強(qiáng)(p<0.05,p<0.01),但對(duì)caspase—8的活性無(wú)明顯影響; 6.ca

5、spase—3抑制劑可明顯抑制鉛誘導(dǎo)的caspase—3的活化,并抑制鉛誘導(dǎo)的HK-2細(xì)胞凋亡; 7.Westernbolt結(jié)果顯示,鉛使caspase—3、caspase—9表達(dá)增高,bcl-2蛋白表達(dá)降低,bax蛋白表達(dá)增高。 結(jié)論:1.一定劑量范圍內(nèi),鉛可導(dǎo)致HK-2細(xì)胞損傷;2.鉛誘導(dǎo)HK-2細(xì)胞凋亡;3.鉛誘導(dǎo)HK-2細(xì)胞凋亡的可能機(jī)制是鉛損壞HK-2細(xì)胞線粒體膜,導(dǎo)致CytC的釋放,激活caspase—9,再

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