家貓卵巢組織的超低溫冷凍保存研究.pdf

1、本試驗(yàn)通過兩步法、經(jīng)典法、玻璃冷凍法溶液VS1和玻璃冷凍法溶液DAP213四種處理冷凍保存了50只家貓的卵巢皮質(zhì)薄片。通過對(duì)新鮮和冷凍復(fù)蘇后的卵巢組織進(jìn)行組織學(xué)觀察、電鏡觀察，分離冷凍后卵巢組織的卵泡進(jìn)行體外培養(yǎng)并檢測(cè)培養(yǎng)液中雌激素水平，從而檢驗(yàn)貓科動(dòng)物卵巢組織在超低溫冷凍后是否保存活性，進(jìn)而選擇一種較為適合貓科動(dòng)物卵巢組織保存的冷凍方法?！　〗M織學(xué)切片顯示，四種冷凍處理以玻璃化冷凍法溶液VS1處理組對(duì)卵巢組織、卵泡正常形態(tài)造成的損傷

2、較小。電鏡觀察可見在冷凍保存后卵母細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)如：透明帶、微絨毛、微管和皮質(zhì)顆粒等受到了不同程度的破壞?！　∈褂妹阜ńY(jié)合機(jī)械法分離卵泡，平均每只家貓可獲得卵泡33.78個(gè)。用臺(tái)盼蘭死活染色計(jì)算卵泡存活率，兩步法、經(jīng)典法、玻璃冷凍法溶液VS1和玻璃冷凍法溶液DAP213四種處理得到的卵泡存活率分別為34.5％，40.0％，53.4％和47.2％。　　經(jīng)過四種處理冷凍保存的卵巢組織，復(fù)蘇后分離得到的直徑為100～210μm的卵泡333

3、個(gè)用于體外培養(yǎng)，四種處理后分離的卵泡均保持了繼續(xù)生長(zhǎng)的能力，其中有一個(gè)卵母細(xì)胞經(jīng)體外培養(yǎng)發(fā)育并排出第一極體。經(jīng)兩步法、經(jīng)典法、玻璃冷凍法溶液VS1和玻璃冷凍法溶液DAP213冷凍保存后分離得到的卵泡培養(yǎng)4d時(shí)卵泡退化率為86.88％、65.63％、68.45％和56.86％，四種方法間差異不顯著；存活卵泡直徑與其開始培養(yǎng)時(shí)相比增長(zhǎng)幅度分別為6.75μm、7.33μm、8.45μm和6.68μm，四種方法間差異不顯著。本試驗(yàn)用酶聯(lián)法測(cè)定卵