白木香種子的超低溫保存研究

1、<p>　　白木香種子的超低溫保存研究</p><p>　　【摘要】 目的】探討白木香種子長(zhǎng)期保存的方法。【方法】將不同含水量的白木香種子放置在液氮罐（-196℃)中保存55d后取出，測(cè)定其發(fā)芽率，并考察冷凍方法對(duì)其發(fā)芽率的影響。【結(jié)果】含水量為１６.３０％的種子發(fā)芽率完全喪失；含水量為１３.０２％、９.３４％的種子發(fā)芽率大大降低；而含水量為７.３５％的種子仍能保持較高的發(fā)芽率。速冷的白木香種子比緩凍

2、的發(fā)芽率高?！窘Y(jié)論】含水量為７.３５％的白木香種子置于液氮中保存為一種安全、有效的長(zhǎng)期保存方法。 </p><p>　　【關(guān)鍵詞】 白木香 超低溫保存 發(fā)芽率 </p><p>　　白木香Aquilaria sinensis(Lour.)Gilg.是我國(guó)特有的珍貴藥用植物，其野生種質(zhì)已遭到嚴(yán)重破壞，被列為國(guó)家二級(jí)重點(diǎn)保護(hù)野生植物［１］。白木香種子屬頑拗性種子，正常含水量的種子常溫條件下

3、１個(gè)月后其發(fā)芽率下降至５０％以下，不利于保存。因此，探討適合白木香種子長(zhǎng)期保存的方法，對(duì)白木香種質(zhì)資源的保護(hù)具有重要意義。國(guó)內(nèi)學(xué)者對(duì)頑拗性種子的超低溫保存已有報(bào)導(dǎo)［２-４］，前期研究結(jié)果也表明［５］，低溫（４℃）有利于含水量為７.３５％的白木香種子的貯藏。本文對(duì)白木香種子進(jìn)行超低溫保存研究，以期尋找適合白木香種子長(zhǎng)期保存的方法，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。 </p><p><b>　　1 材料與方法 <

4、/b></p><p><b>　　1.1 材料 </b></p><p>　　自白木香GAP基地（廣東省電白縣）采收果實(shí)，收集不同含水量的種子，密封，４℃冰箱放置20d后，分別測(cè)其含水量與發(fā)芽率。 </p><p><b>　　1.2 儀器 </b></p><p>　　Sartoriu

5、s BP 110S 電子分析天平（德國(guó)）；電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱GZX907OMBE（上海博訊實(shí)業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠）；LRH250GS人工氣候箱（廣東省醫(yī)療器械廠）；不銹鋼手提式壓力蒸汽滅菌器（廣州市華南醫(yī)療器械有限公司）；YJ875醫(yī)用凈化工作臺(tái)（中國(guó)）；RO/DI50RE純水機(jī)（中國(guó)）。 </p><p>　　1.3 冷凍與解凍方法 </p><p>　　將４種不同含水量的

6、種子密封于冷凍管中，直接投入液氮中保存；另將含水量為７.３５％的種子密封于冷凍管中，先置4℃冰箱放置4h，再于-２０℃冰箱放置3h，最后投入液氮中保存。55d后取出，室溫（３０℃）３３min解凍，分別測(cè)定其發(fā)芽率。 </p><p>　　1.4 發(fā)芽率測(cè)定 </p><p>　　在消毒過(guò)的培養(yǎng)皿上鋪一層已消毒過(guò)的濾紙，加入少量純凈水，以濾紙濕潤(rùn)，加水量以?xún)A斜時(shí)有少量水為宜。另將種子用蒸餾

7、水反復(fù)沖洗多次，放置濾紙上，粒與粒間距不小于種子大?Ｊ匝櫓腫臃殖桑醋?，每组２０粒。将培养皿放灾R斯て螄渲校ǎ玻浮媯?，每天观矚e鈾３質(zhì)?，并兼@擠⒀殼榭觶垂絧發(fā)芽/%＝（N發(fā)芽/N樣本）×100%,計(jì)算發(fā)芽率。 </p><p><b>　　2 結(jié)果 </b></p><p>　　白木香種子于液氮中貯藏55d后，發(fā)芽率受含水量的影響較大，含水量為１

8、６.３0％的種子發(fā)芽率完全喪失；含水量為１３.０２％、９.３４％的種子發(fā)芽率大大降低；含水量為７.３５％的種子仍能保持較高的發(fā)芽率（見(jiàn)表１）。冷凍方式研究結(jié)果表明，速凍的白木香種子比緩凍的發(fā)芽率要高。表1 超低溫保存對(duì)白木香種子發(fā)芽率的影響統(tǒng)計(jì)方法：秩和檢驗(yàn)；①：Ｐ＜０.０１，與超低溫保存前比較；②：Ｐ＜０.０１，與前３種含水量比較；③：Ｐ＜０.０５，與緩凍比較 </p><p><b>　　3 討

9、論 </b></p><p>　　種子的超低溫保存，含水量高低以及脫水方法是關(guān)鍵因素。含水量過(guò)高會(huì)造成保存材料在冷凍和解凍過(guò)程中受到凍害甚至死亡，過(guò)低又會(huì)造成脫水傷害影響活力。若能最大限度地減少脫水傷害和降低含水量，保存材料的活力就能得到最大限度的保持。本研究結(jié)果表明，含水量為７.３５％的白木香種子，超低溫條件下保存55d后，較常溫及低溫（４℃)條件下保存３５d后，能保持較高的發(fā)芽率［5］，表明超低溫

10、（-１９６℃）利于白木香種子的長(zhǎng)期保存，為白木香種質(zhì)資源的長(zhǎng)期保存提供了安全、有效的方法。 </p><p><b>　　【參考文獻(xiàn)】 </b></p><p>　?。郏保菪禅櫲A，蔡永光，徐祥浩．熱帶藥用植物栽培［M］．廣州：廣東科技出版社，１９８６：１９２． </p><p>　　［２］李慶榮，鄭郁善．頑拗性種子種質(zhì)超低溫保存研究進(jìn)展［Ｊ］．

11、江西農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，２００３，２５（４）：６０８． </p><p>　?。郏常輳堉螄?guó)，王君暉，劉 驊，等.鐵皮石斛種子的超低溫保存研究［Ｊ］．浙江省醫(yī)學(xué)科學(xué)院學(xué)報(bào)，１９９６，７（２７）：７． </p><p>　?。郏矗輳堉径?，石思信，肖建平．野生人參種子超低溫保存［Ｊ］．植物資源與環(huán)境，１９９８，７（４）：６１． </p><p>　　［５］劉軍民，徐鴻華，徐梓勤