油菜抗草甘膦、抗蟲基因工程研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、本論文研究的目的是將抗草甘膦、抗蟲雙價基因(aroA-M12+Bts1m)以及抗草甘膦基因(aroA-M1)通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)等方法導(dǎo)入到油菜優(yōu)良品種湘油15號、湘油14號和Y03-211中,獲得抗草甘膦以及抗草甘膦、抗蟲雙抗油菜轉(zhuǎn)基因株系。為培育擁有我國自主知識產(chǎn)權(quán)的轉(zhuǎn)基因油菜品種奠定基礎(chǔ)。同時,利用超聲波處理花粉的方法,研究以花粉作為媒介進(jìn)行油菜基因轉(zhuǎn)化的可能性。 我國是世界油菜生產(chǎn)大國。種植面積和總產(chǎn)均居世界之首。然而蟲害和草

2、害是影響產(chǎn)量的重要因素。采用植物基因工程的手段,選育抗草甘膦,以及抗草甘瞵、抗蟲雙抗油菜新品系將是解決生產(chǎn)上蟲害、草害問題的簡便、有效的途徑。 本文首先建立了油菜高效組織培養(yǎng)體系,在此基礎(chǔ)上建立了適合于油菜農(nóng)桿菌介導(dǎo)轉(zhuǎn)化法的高效轉(zhuǎn)化體系。采用農(nóng)桿菌介導(dǎo)轉(zhuǎn)化法,將aroA-M1基因,aroA-M12+Bts1m雙價基因分別轉(zhuǎn)入到油菜細(xì)胞中,通過誘導(dǎo)培養(yǎng)和草甘膦篩選,獲得轉(zhuǎn)基因再生植株。對轉(zhuǎn)基因再生植株進(jìn)行了Southernblot

3、,Westernblot分析,以及抗蟲、抗草甘膦鑒定,結(jié)果表明:aroA-M1基因,aroA-M12+Bts1m雙價基因確已通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)法轉(zhuǎn)入并整合到油菜基因組中。通過對轉(zhuǎn)基因植株進(jìn)行生物抗性鑒定,在轉(zhuǎn)aroA-M12+Bts1m雙價基因的71個轉(zhuǎn)化植株中,共得到16個高抗蟲、抗草甘膦的雙抗轉(zhuǎn)基因植株。在轉(zhuǎn)aroA-M1基因的72個轉(zhuǎn)基因植株中共得到20個高抗草甘膦的轉(zhuǎn)基因植株。對轉(zhuǎn)aroA-M1基因的T1代進(jìn)行草甘膦抗性鑒定、PCR

4、、RT-PCR分析的結(jié)果表明:外源基因在轉(zhuǎn)基因植株中能夠穩(wěn)定遺傳,并且T1代的遺傳表現(xiàn)符合孟德爾遺傳規(guī)律。 本文還利用超聲波處理花粉,并輔以人工授粉的方法,將aroA-M1基因?qū)氲接筒似废抵?。對轉(zhuǎn)基因T1代植株進(jìn)行草甘膦篩選、PCR檢測、Westernblot分析的結(jié)果證明,外源基因確已通過超聲波處理后的花粉轉(zhuǎn)入到受體植物中。 通過本文的研究還證明:aroA-M1基因和aroA-M12基因在油菜轉(zhuǎn)化中不僅可以用作目的基

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