草甘膦氧化還原酶基因轉化油菜的研究.pdf

1、本研究根據草甘膦氧化還原酶GOX基因的序列設計一對引物,以轉基因抗除草劑油菜的總DNA為模板進行PCR擴增,克隆出GOX基因全長編碼區(qū),長度為1296bp。將此基因插入含有啟動子CaMV35S與終止子NOS序列的pPZP221中,構建植物表達載體pPZP221-GOX。以甘藍型油菜區(qū)試00S-76,太空3-19,繁4,繁5四種材料為受體,以植物表達載體pPZP221-GOX為外源基因供體,進行了花粉管通道法轉基因研究。在授粉后20h,2

2、4h,30h,采用不切柱頭和切去柱頭上端1/3部分的2種方法,立即在柱頭上滴加質粒DNA溶液,成熟后收獲轉化種子。對T0代植株進行PCR檢測,結果表明授粉后20h、24h和30h導入所獲得的陽性率分別為1.1％、3.2％和1.4％。不同處理方法比較結果表明,切去1/3柱頭后導入所獲得的陽性率較高,達到3.0％,而未切去柱頭,其陽性率為1.0％。為了鑒定T0代植株的抗性,經160mg/L慶大霉素和0.02％草甘膦篩選培養(yǎng),分別得到0.7％