抗草甘膦基因（EPSPS）的克隆與功能驗證.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、5-烯醇式丙酮酸莽草酸-3-磷酸合成酶EPSPS是莽草酸途徑中的一個關鍵酶，是許多抗生素、除草劑作用的首選靶標酶。草甘膦是一種廣譜型滅生性除草劑，植物中EPSP合成酶的過量表達或某些活性位點氨基酸的突變對高劑量的草甘膦有較強的耐受性。 本實驗根據(jù) EPSP 合成酶基因的保守序列設計一對簡并引物，以青麻 (Abutilon TheophrastiMedic)的總DNA為模板進行PCR擴增，克隆出epsps基因的部分DNA片段，長度

2、為1446bp，利用Trizol Reagent 改良RNA提取方法提取青麻 RNA，以青麻的總RNA為反轉(zhuǎn)錄的模板，采用RACE技術(shù)克隆、拼結(jié)出了青麻epsps基因的全長cDNA序列。該序列長為1886bp，5′UTR長64bp，3′UTR長280bp，3′端有ployA尾巴，G+C含量44.80﹪，編碼了523個氨基酸。 同源比較該段序列所編碼的氨基酸序列可以發(fā)現(xiàn)EPSP合成酶有較高的保守性，與歐洲山毛櫸、水稻、擬南芥、菜豆

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