豬圓環(huán)病毒II型ORF2真核表達質粒構建及免疫抗體檢測研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、本研究采用本課題組分離鑒定的豬圓環(huán)病毒分離株PCV2WHN，設計一對引物，用PCR擴增出PCV2的ORF2基因，并克隆到pUCm-T載體上，測序得ORF2基因全長705bp，編碼234個氨基酸。　　用KpnI和BamHI雙酶切的方法處理pUCm-PCV-ORF2和真核表達載體pcDNA3.1(+)，進行連接反應，轉化大腸桿菌JM109，酶切和PCR鑒定結果表明，成功構建了真核表達質粒pcDNA-PCV-ORF2。用堿裂解法提取并純化真

2、核表達質粒pcDNA-PCV-ORF2。　　用真核表達質粒pcDNA-PCV-ORF2免疫小鼠(第一次免疫后兩周進行第二次免疫)，用間接ELISA方法檢測免疫抗體的結果表明，第一次免疫后一周產生抗體，二免后，小鼠的抗體水平迅速上升，在第4周達到高峰，其后緩慢下降，可持續(xù)11周以上?！　∮肞CR檢測了pcDNA-PCV-ORF2的機體組織器官中的動態(tài)分布。表明，首免后3h到28d小鼠的各種組織器官中均能擴增出目的基因片段。在第44d腦

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