klf4：一個熱休克反應和熱休克蛋白表達的新調控介質

1、中南大學博士學位論文KLF4：一個熱休克反應和熱休克蛋白表達的新調控介質姓名：劉瑛申請學位級別：博士專業(yè)：病理學與病理生理學指導教師：肖獻忠20060901博士學位論文中文摘要小鼠探討了HSFl對Ⅺ。F4mRNA表達的可能影響，結果發(fā)現HSFl既可以促進l(IJ4的基礎表達，又可以促進其在熱休克時的誘導表達。此外，我們還在ⅪF4基因啟動子區(qū)找到了HSFl結合元件(heatshockelem翎t(yī)，HSE)。由此可見，KLF4是HsFl調控

2、的下游基因。HSPs是熱休克反應中受HSFl直接調控的重要功能蛋白。作為熱休克反應中表達增加的轉錄因子，Ⅺ。F4對HSPs基因表達的可能影響引起了我們的關注。以前的研究發(fā)現，Spl觸F家族的某些成員既可以調控HSPs的組成型表達，又可以調控其在熱休克時的誘導表達。因此，本研究第二部分首先構建了Ⅺ。F4過表達細胞株，并采用反義寡核苷酸技術建立了內源性KLF4表達抑制的模型；接著分別采用R1：PCR和Westemblot在mIⅢA和蛋白質水

3、平檢測了Ⅺ。F4過表達和內源性Ⅺ。F4表達抑制對小分子HSPs家族的aB晶狀體蛋白和HSp25，HSP70家族的HSP72和HSP73以及HSP90家族的HSP84和HSP86的組成型表達和誘導表達的影響。結果發(fā)現，ⅪJ4過表達能夠上調上述HSPS的組成型表達，而Ⅺ。F4表達抑制則下調上述HSPs的組成型表達：但Ⅺ。F4過表達或表達抑制均不影響上述HSPs的誘導表達。為了進一步闡明ⅪJ4調控a晶狀體蛋白、HsP25和HSP84組成型表達

4、的機制，本研究采用EMSA和熒光素酶報告基因方法進行了深入探討。結果發(fā)現，Ⅺ。F4能夠通過其DNA結合結構域與G晶狀體蛋白、HsP25和HSP84基因啟動子區(qū)的KLF4結合元件相結合而直接促進其轉錄，從而維持其組成型表達。為了更全面地了解Ⅺ。F4能夠調節(jié)哪些HsPs的組成型表達，我們進一步采用cDNA芯片檢測了Ⅺ。F4過表達對HSPs基因表達的影響，結果發(fā)現有9個HSPs的組成型表達可能受到Ⅺ。F4的調控。此外，本研究還發(fā)現熱休克反應中