klf4：一個熱休克反應(yīng)和熱休克蛋白表達的新調(diào)控介質(zhì)

1、中南大學(xué)博士學(xué)位論文KLF4：一個熱休克反應(yīng)和熱休克蛋白表達的新調(diào)控介質(zhì)姓名：劉瑛申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：病理學(xué)與病理生理學(xué)指導(dǎo)教師：肖獻忠20060901博士學(xué)位論文中文摘要小鼠探討了HSFl對Ⅺ。F4mRNA表達的可能影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)HSFl既可以促進l(IJ4的基礎(chǔ)表達，又可以促進其在熱休克時的誘導(dǎo)表達。此外，我們還在ⅪF4基因啟動子區(qū)找到了HSFl結(jié)合元件(heatshockelem翎t(yī)，HSE)。由此可見，KLF4是HsFl調(diào)控

2、的下游基因。HSPs是熱休克反應(yīng)中受HSFl直接調(diào)控的重要功能蛋白。作為熱休克反應(yīng)中表達增加的轉(zhuǎn)錄因子，Ⅺ。F4對HSPs基因表達的可能影響引起了我們的關(guān)注。以前的研究發(fā)現(xiàn)，Spl觸F家族的某些成員既可以調(diào)控HSPs的組成型表達，又可以調(diào)控其在熱休克時的誘導(dǎo)表達。因此，本研究第二部分首先構(gòu)建了Ⅺ。F4過表達細胞株，并采用反義寡核苷酸技術(shù)建立了內(nèi)源性KLF4表達抑制的模型；接著分別采用R1：PCR和Westemblot在mIⅢA和蛋白質(zhì)水

3、平檢測了Ⅺ。F4過表達和內(nèi)源性Ⅺ。F4表達抑制對小分子HSPs家族的aB晶狀體蛋白和HSp25，HSP70家族的HSP72和HSP73以及HSP90家族的HSP84和HSP86的組成型表達和誘導(dǎo)表達的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，ⅪJ4過表達能夠上調(diào)上述HSPS的組成型表達，而Ⅺ。F4表達抑制則下調(diào)上述HSPs的組成型表達：但Ⅺ。F4過表達或表達抑制均不影響上述HSPs的誘導(dǎo)表達。為了進一步闡明ⅪJ4調(diào)控a晶狀體蛋白、HsP25和HSP84組成型表達

4、的機制，本研究采用EMSA和熒光素酶報告基因方法進行了深入探討。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，Ⅺ。F4能夠通過其DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域與G晶狀體蛋白、HsP25和HSP84基因啟動子區(qū)的KLF4結(jié)合元件相結(jié)合而直接促進其轉(zhuǎn)錄，從而維持其組成型表達。為了更全面地了解Ⅺ。F4能夠調(diào)節(jié)哪些HsPs的組成型表達，我們進一步采用cDNA芯片檢測了Ⅺ。F4過表達對HSPs基因表達的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)有9個HSPs的組成型表達可能受到Ⅺ。F4的調(diào)控。此外，本研究還發(fā)現(xiàn)熱休克反應(yīng)中