klf4：一個(gè)熱休克反應(yīng)和熱休克蛋白表達(dá)的新調(diào)控介質(zhì)

1、中南大學(xué)博士學(xué)位論文KLF4：一個(gè)熱休克反應(yīng)和熱休克蛋白表達(dá)的新調(diào)控介質(zhì)姓名：劉瑛申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：病理學(xué)與病理生理學(xué)指導(dǎo)教師：肖獻(xiàn)忠20060901博士學(xué)位論文中文摘要小鼠探討了HSFl對(duì)Ⅺ。F4mRNA表達(dá)的可能影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)HSFl既可以促進(jìn)l(IJ4的基礎(chǔ)表達(dá)，又可以促進(jìn)其在熱休克時(shí)的誘導(dǎo)表達(dá)。此外，我們還在ⅪF4基因啟動(dòng)子區(qū)找到了HSFl結(jié)合元件(heatshockelem翎t(yī)，HSE)。由此可見(jiàn)，KLF4是HsFl調(diào)控

2、的下游基因。HSPs是熱休克反應(yīng)中受HSFl直接調(diào)控的重要功能蛋白。作為熱休克反應(yīng)中表達(dá)增加的轉(zhuǎn)錄因子，Ⅺ。F4對(duì)HSPs基因表達(dá)的可能影響引起了我們的關(guān)注。以前的研究發(fā)現(xiàn)，Spl觸F家族的某些成員既可以調(diào)控HSPs的組成型表達(dá)，又可以調(diào)控其在熱休克時(shí)的誘導(dǎo)表達(dá)。因此，本研究第二部分首先構(gòu)建了Ⅺ。F4過(guò)表達(dá)細(xì)胞株，并采用反義寡核苷酸技術(shù)建立了內(nèi)源性KLF4表達(dá)抑制的模型；接著分別采用R1：PCR和Westemblot在mIⅢA和蛋白質(zhì)水

3、平檢測(cè)了Ⅺ。F4過(guò)表達(dá)和內(nèi)源性Ⅺ。F4表達(dá)抑制對(duì)小分子HSPs家族的aB晶狀體蛋白和HSp25，HSP70家族的HSP72和HSP73以及HSP90家族的HSP84和HSP86的組成型表達(dá)和誘導(dǎo)表達(dá)的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，ⅪJ4過(guò)表達(dá)能夠上調(diào)上述HSPS的組成型表達(dá)，而Ⅺ。F4表達(dá)抑制則下調(diào)上述HSPs的組成型表達(dá)：但Ⅺ。F4過(guò)表達(dá)或表達(dá)抑制均不影響上述HSPs的誘導(dǎo)表達(dá)。為了進(jìn)一步闡明ⅪJ4調(diào)控a晶狀體蛋白、HsP25和HSP84組成型表達(dá)

4、的機(jī)制，本研究采用EMSA和熒光素酶報(bào)告基因方法進(jìn)行了深入探討。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，Ⅺ。F4能夠通過(guò)其DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域與G晶狀體蛋白、HsP25和HSP84基因啟動(dòng)子區(qū)的KLF4結(jié)合元件相結(jié)合而直接促進(jìn)其轉(zhuǎn)錄，從而維持其組成型表達(dá)。為了更全面地了解Ⅺ。F4能夠調(diào)節(jié)哪些HsPs的組成型表達(dá)，我們進(jìn)一步采用cDNA芯片檢測(cè)了Ⅺ。F4過(guò)表達(dá)對(duì)HSPs基因表達(dá)的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)有9個(gè)HSPs的組成型表達(dá)可能受到Ⅺ。F4的調(diào)控。此外，本研究還發(fā)現(xiàn)熱休克反應(yīng)中