刺山柑熱休克蛋白基因克隆及原核表達(dá).pdf

1、熱休克蛋白(heat shock protein,HSP)是植物體內(nèi)最重要的一類(lèi)逆境誘導(dǎo)蛋白，它們?cè)谀婢硹l件，尤其是溫度脅迫下迅速合成，使細(xì)胞免受損害。HSP具有分子伴侶功能，參與各種各樣的細(xì)胞代謝過(guò)程，它們還與植物抗熱、抗冷以及抗氧化性密切相關(guān)。因此，熱激基因是育種工作中具有重要實(shí)用價(jià)值的優(yōu)良基因資源。刺山柑(Capparis spinosa)作為干旱區(qū)特有植物，具有極強(qiáng)的干旱適應(yīng)性，它抗旱、耐高溫、耐風(fēng)蝕、耐瘠薄，其生存的基本環(huán)境，

2、總是與干旱背景中比較原始的荒漠土壤相聯(lián)系，這些特點(diǎn)使刺山柑成為育種工作中不可多得的優(yōu)良抗逆基因的供體，對(duì)刺山柑的抗逆基因資源進(jìn)行開(kāi)發(fā)和利用具有重要的實(shí)踐意義。 RNA提取是基因工程研究當(dāng)中的重要環(huán)節(jié)，RNA質(zhì)量的優(yōu)劣是基因克隆成敗的關(guān)鍵，通過(guò)實(shí)驗(yàn)，我們確立了一種最合適的提取刺山柑葉片總RNA的改良SDS法，該方法具有成本低、時(shí)間短、獲得的RNA產(chǎn)量高、質(zhì)量好等特點(diǎn)。 利用RT-PCR結(jié)合cDNA末端快速擴(kuò)增(rapid

3、amplification of cDNA ends，RACE)方法，我們成功的從刺山柑葉片中分離了HSP基因家族的一個(gè)HSP70基因(CsHSP70)和一個(gè)sHSP基因(CsSHSP)，并在Genebank上注冊(cè)，登錄號(hào)分別為EU574936和EU574935。CsHSP70基因全長(zhǎng)2202bp，ORF共1950bp，編碼649個(gè)氨基酸，表達(dá)產(chǎn)物分子量為71.0446kD，序列分析表明該基因?qū)儆贖SP70基因家族。CsSHSP基因全長(zhǎng)