肉雞組織的熱應激損傷和熱休克蛋白60的表達變化.pdf

1、本研究以雞為實驗動物建立了具有實踐指導意義的熱應激模型.在此基礎上采用組織病理學、免疫組織化學、ELISA、熒光定量PCR等方法，研究不同熱應激時間對肉雞不同組織臟器的應激性損傷、Hsp60及其mRNA的表達情況。 將120只肉雞隨機分成1組(對照組)、2組(熱應激1 h組)、3組(熱應激2h組)、4組(熱應激3h組)、5組(熱應激5h組)和6組(熱應激10 h組)，每組20只.除了對照組不進行熱應激處理(溫度控制在25±1℃)

2、之外，將其它各熱應激組的環(huán)境溫度在20 min內(nèi)從室溫突然升至37±1℃.按試驗設定的時間剖殺對照組肉雞和熱應激處理各組肉雞，每組受試雞按要求采集外周血液，經(jīng)離心制備血清，-20℃保存用于CK和GPT活性檢測；分別解剖受試雞取心臟、肝臟、腎臟和肺臟，一部分固定在4％多聚甲醛中，用于HE染色和免疫組化檢測，另一部分置于-70℃保存，用于Hsp60及其mRNA的檢測。 試驗結(jié)果顯示，持續(xù)熱應激處理后的肉雞血液肌酸激酶(CK)和谷丙轉(zhuǎn)

3、氨酶(GPT)均顯著升高，CK在2、3、5和10h與對照組差異極顯著(P<0.01)，GPT在3h與對照組差異顯著(P<0.05)，在5 h和10 h極顯著升高(P<0.01)，提示熱應激導致機體損傷隨著應激時間延長而加劇。 HE染色結(jié)果顯示，持續(xù)熱應激處理3h后的肉雞心臟和腎臟組織均呈現(xiàn)出以顆粒變性和水泡變性為主要特征的不同程度的病理性損傷，并且這種病理損傷隨著熱應激時間的延長而加重.對照組雞無以上病理變化。 IH

4、C實驗結(jié)果顯示，不管是實驗組還是對照組，Hsp60都有表達，在心臟主要定位于心肌纖維上的胞漿中，而在肝臟主要定位于肝細胞胞漿上，腎臟中主要定位于腎小管上皮細胞胞漿上，但是，熱應激組雞Hsp60陽性信號分布不均勻，主要集中于細胞結(jié)構(gòu)相對完整的部位，這個結(jié)果提示Hsp60的表達與熱應激損傷有關。 ELISA結(jié)果顯示，Hsp60在三個組織的表達量不一樣。心臟中Hsp60在熱應激2h就極顯著升高，并且，在3h、5h和10h一直維持高表

5、達，與對照組比較差異顯著，肝臟中Hsp60在熱應激后呈下降趨勢，在熱應激3h時降帶最低點，與對照差異極顯著，在5h是有個短暫的恢復區(qū)，在10 h時又顯著下降，腎臟Hsp60變化趨勢與肝臟相似，但是差異不顯著.熱應激后Hsp60在三個臟器表達各不相同，提示Hsp60發(fā)揮保護作用具有組織依賴性， 熒光定量PCR結(jié)果顯示，心臟中hsp60 mRNA在2h極顯著升高，呈現(xiàn)一個峰值，隨著熱應激時間的延長，逐漸恢復正常.肝臟中hsp60 m

6、RNA在熱應激1h就迅速升碩士學位論文：肉雞的熱應激損傷與熱休克蛋白60的表達變化高，在2h短暫恢復至正常，在3h、5h和10h又逐漸升高，與對照組差異顯著.腎臟hsp60 mRNA變化趨勢與心臟相似，在2h出現(xiàn)一個峰值極顯著升高，然后逐漸恢復正常.hsp60 mRNA熱應激后主要表現(xiàn)為升高，且這種表達在不同熱時間表現(xiàn)不一樣，提示熱應激可以誘導hsp60 mRNA的高表達，并且hsp60 mRNA的表達具有時間特異性。 熱應激不