南瓜韌皮部特異啟動子dENP在轉(zhuǎn)基因馬鈴薯中的表達特征.pdf

1、馬鈴薯是世界上僅次于水稻、小麥、玉米的第四大糧食作物，也是我國的第四大糧食作物。馬鈴薯既是重要的糧食作物，又是大宗蔬菜作物，還廣泛用于食品深加工和淀粉、酒精等工業(yè)加工用途。因此，馬鈴薯在我國工農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中占有重要地位。然而，馬鈴薯病蟲害嚴重影響其產(chǎn)量和品質(zhì)，其中最主要的病害是由蚜蟲引起的病毒病，其不僅直接吸食馬鈴薯葉片汁液，也傳播病毒引起馬鈴薯病毒病的流行。當前，利用基因工程技術把一些外源的抗蟲、抗病、抗逆等基因的表達框架導入到植物中，獲

2、得了很大的成功。但轉(zhuǎn)基因植物中外源基因的表達框架的啟動子主要是組成型表達啟動子，如CaMV35S，Ubiquitin等，這些啟動子使得外源基因在植物體各個部位表達，不能集中在某些昆蟲危害的組織器官，使一些昆蟲不取食的組織器官也得到表達，造成了外源蛋白利用的不經(jīng)濟，加重了植物的負擔，也給轉(zhuǎn)基因安全帶來較大的壓力。本試驗利用已經(jīng)克隆構(gòu)建的增強型南瓜韌皮部特異啟動子dENP驅(qū)動GUS基因，在pBI121的基礎上構(gòu)建了植物表達載體pBdENP，

3、同時利用含有CaMV35S啟動子和GUS嵌合基因的pBI121植物表達載體作為對照，二者同時通過農(nóng)桿菌介導的方法轉(zhuǎn)化馬鈴薯。通過抗性篩選、再生芽伸長、生根等組織培養(yǎng)，獲得100多棵抗性轉(zhuǎn)基因再生植株。通過PCR初步鑒定，大約有60％為陽性；對這些PCR陽性植株進行Southernblot驗證，確定外源基因的插入位點和拷貝數(shù)。最后對7個獨立轉(zhuǎn)化體進行GUS的組織化學染色定性檢測和GUS酶活性的定量測定；結(jié)果表明dENP啟動子驅(qū)動的GUS在