梨試管苗長期繼代培養(yǎng)中的形態(tài)發(fā)生能力與遺傳穩(wěn)定性研究.pdf

1、在植物組織培養(yǎng)過程中，繼代培養(yǎng)是其中的重要環(huán)節(jié)，而長期繼代則是種質(zhì)資源離體保存的必要手段。本研究以繼代培養(yǎng)1～55代(0～4年)的‘金花’(PyrusbrestchneideriRehd.cv.Jinhua)和‘金水’(P.pyrifoliacv.Jinshui)梨組培苗為試材，以田間材料為對(duì)照，通過對(duì)試管苗的增殖、生根、葉片不定芽再生以及RAPD和ISSR分子標(biāo)記的對(duì)比分析了它們的形態(tài)發(fā)生能力及遺傳穩(wěn)定性。主要結(jié)果如下： (1

2、)繼代次數(shù)在16代以內(nèi)的組培苗繼代繁殖系數(shù)均較低，隨繼代次數(shù)的增加，繁殖能力穩(wěn)定在較高水平，之后又出現(xiàn)下降，兩個(gè)品種開始下降的繼代范圍不同，繼代培養(yǎng)超過55代的組培苗增殖能力較弱。 (2)繼代培養(yǎng)55代范圍內(nèi)，‘金花’和‘金水’在培養(yǎng)初期，組培苗生根率最低，僅有41.675和15.56％。隨著繼代次數(shù)的增加，試管苗的生根能力增強(qiáng)。當(dāng)繼代次數(shù)達(dá)55代時(shí)，‘金花’和‘金水’試管苗的生根能力最強(qiáng)，分別為58.33％和34.92％。表明

3、兩個(gè)品種的組培苗都能不受繼代時(shí)間長短的影響而保持較好的生根能力，并且‘金花’的生根能力明顯優(yōu)于‘金水’。 (3)‘金水’梨在第8代時(shí)其葉片不定芽的再生率處于較低水平；當(dāng)?shù)?6代時(shí)，其葉片的再生率和出芽率都明顯增加；當(dāng)繼代到40代時(shí)達(dá)到最大值。但是，具有分化能力的‘金水’梨葉片愈傷組織，經(jīng)過55個(gè)月(55代)的繼代培養(yǎng)，其分化能力隨著繼代次數(shù)的增加而逐漸喪失。 (4)以‘金花’和‘金水’的田間材料為對(duì)照，選取繼代次數(shù)分別為

4、8、16、29、40、50代的‘金花’和6、13、34、40、50代的‘金水’組培苗為試材，運(yùn)用16個(gè)RAPD和8個(gè)ISSR引物對(duì)其進(jìn)行擴(kuò)增，共得到1096和1413條清晰RAPD帶，569和582條ISSR帶?！鸹ā镩g材料與其繼代植株間的遺傳差異范圍為1.65％～4.19％(RAPD)和1.05％～5.24％(ISSR)，‘金水’為1.07％～3.66％(RAPD)和0～4.72％(ISSR)。梨的組織培養(yǎng)中，體細(xì)胞無性系變異廣泛