牛支原體遺傳穩(wěn)定性初步研究.pdf

1、牛支原體(Mypcoplasmaboris)作為感染牛的一種重要的致病性支原體,可以引起包括肺炎、乳腺炎、關(guān)節(jié)炎、生殖道損傷以及結(jié)膜炎等在內(nèi)的多種疾病,同時(shí)還可與其他病原協(xié)同,造成繼發(fā)感染。目前,國(guó)內(nèi)外關(guān)于牛支原體的研究主要集中在病原的免疫及核酸鑒別診斷方面,國(guó)外研究較為深入;國(guó)內(nèi)研究卻處于起步階段,這主要和我國(guó)牛支原體流行較晚、規(guī)模不大,病原學(xué)和血清學(xué)數(shù)據(jù)不夠充分,缺乏流行病學(xué)研究資料,分離鑒定的菌株數(shù)量和種類少,鑒定方面缺乏足夠的參

2、考菌株和技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)等有關(guān)。關(guān)于牛支原體遺傳穩(wěn)定性的研究報(bào)道較少,幾乎為空白.為了臨床上預(yù)防和控制牛支原體及其支原體病奠定理論基礎(chǔ),以及為安全穩(wěn)定的疫苗研發(fā)提供參考依據(jù),本課題初步對(duì)篩選的三個(gè)牛支原體菌株進(jìn)行了遺傳穩(wěn)定性研究,主要內(nèi)容有:
　　 1、牛支原體菌落形態(tài)觀察
　　 通過觀察篩選的不同地區(qū)的三個(gè)牛支原體菌株的顯微結(jié)構(gòu),研究表觀遺傳穩(wěn)定性。結(jié)果:牛支原體在前幾代生長(zhǎng)中,出現(xiàn)典型菌落即“煎蛋樣”且相對(duì)穩(wěn)定,隨著傳代時(shí)間

3、推移,形成越來越多的中央蛋黃結(jié)構(gòu)缺失的“煎蛋樣”菌落,顯示出表觀遺傳不穩(wěn)定.
　　 2、牛支原體生長(zhǎng)情況研究
　　 通過顏色變化單位(CCU)和pH值變化情況研究牛支原體的遺傳穩(wěn)定性。結(jié)果:顏色變化單位除W70總體波動(dòng)不大外,其他兩個(gè)菌株均出現(xiàn)較大波動(dòng);三個(gè)菌株pH值統(tǒng)計(jì)分析均為0.01　　 3、牛支原體耐藥性初步研究
　　 運(yùn)用微量稀釋法測(cè)定牛支原

4、體的最低抑菌濃度(MIC)。結(jié)果:環(huán)丙沙星的MIC抑菌范圍為64～128ug/mL,恩諾沙星的MIC值為4～8ug/mL,紅霉素的MIC值為2～4ug/mL,諾氟沙星的MIC值在8-16ug/mL之間。表明:牛支原體對(duì)紅霉素的耐藥性最低,其次是恩諾沙星、諾氟沙星,對(duì)環(huán)丙沙星的耐藥性最高。
　　 通過在添加有最低抑菌濃度的基礎(chǔ)培養(yǎng)基上觀察牛支原體的顏色變化單位,反映牛支原體的生長(zhǎng)情況,從而研究牛支原體的遺傳穩(wěn)定性。結(jié)果:牛支原體傳

5、代培養(yǎng)一定時(shí)間出現(xiàn)耐藥性,顯示出遺傳不穩(wěn)定。因此,在臨床防治牛支原體病時(shí)要注意避免同種藥物的長(zhǎng)期使用,以避免耐藥性的產(chǎn)生。
　　 4、牛支原體單鏈構(gòu)象多態(tài)性分析(PCR-SSCP)
　　 首先采用柱式液體樣品總核酸抽提試劑盒統(tǒng)一提取每個(gè)菌所有代次的基因組DNA,保證試驗(yàn)條件的一致;然后通過牛支原體特異性片段oppD/F及16srRNA進(jìn)行基因組DNA純度、完整性鑒定;最后運(yùn)用單鏈構(gòu)象多態(tài)性(SSCP)分析法對(duì)牛支原體16