牛支原體遺傳穩(wěn)定性初步研究.pdf

1、牛支原體(Mypcoplasmaboris)作為感染牛的一種重要的致病性支原體,可以引起包括肺炎、乳腺炎、關節(jié)炎、生殖道損傷以及結膜炎等在內的多種疾病,同時還可與其他病原協同,造成繼發(fā)感染。目前,國內外關于牛支原體的研究主要集中在病原的免疫及核酸鑒別診斷方面,國外研究較為深入;國內研究卻處于起步階段,這主要和我國牛支原體流行較晚、規(guī)模不大,病原學和血清學數據不夠充分,缺乏流行病學研究資料,分離鑒定的菌株數量和種類少,鑒定方面缺乏足夠的參

2、考菌株和技術標準等有關。關于牛支原體遺傳穩(wěn)定性的研究報道較少,幾乎為空白.為了臨床上預防和控制牛支原體及其支原體病奠定理論基礎,以及為安全穩(wěn)定的疫苗研發(fā)提供參考依據,本課題初步對篩選的三個牛支原體菌株進行了遺傳穩(wěn)定性研究,主要內容有:
　　 1、牛支原體菌落形態(tài)觀察
　　 通過觀察篩選的不同地區(qū)的三個牛支原體菌株的顯微結構,研究表觀遺傳穩(wěn)定性。結果:牛支原體在前幾代生長中,出現典型菌落即“煎蛋樣”且相對穩(wěn)定,隨著傳代時間

3、推移,形成越來越多的中央蛋黃結構缺失的“煎蛋樣”菌落,顯示出表觀遺傳不穩(wěn)定.
　　 2、牛支原體生長情況研究
　　 通過顏色變化單位(CCU)和pH值變化情況研究牛支原體的遺傳穩(wěn)定性。結果:顏色變化單位除W70總體波動不大外,其他兩個菌株均出現較大波動;三個菌株pH值統計分析均為0.01　　 3、牛支原體耐藥性初步研究
　　 運用微量稀釋法測定牛支原

4、體的最低抑菌濃度(MIC)。結果:環(huán)丙沙星的MIC抑菌范圍為64～128ug/mL,恩諾沙星的MIC值為4～8ug/mL,紅霉素的MIC值為2～4ug/mL,諾氟沙星的MIC值在8-16ug/mL之間。表明:牛支原體對紅霉素的耐藥性最低,其次是恩諾沙星、諾氟沙星,對環(huán)丙沙星的耐藥性最高。
　　 通過在添加有最低抑菌濃度的基礎培養(yǎng)基上觀察牛支原體的顏色變化單位,反映牛支原體的生長情況,從而研究牛支原體的遺傳穩(wěn)定性。結果:牛支原體傳

5、代培養(yǎng)一定時間出現耐藥性,顯示出遺傳不穩(wěn)定。因此,在臨床防治牛支原體病時要注意避免同種藥物的長期使用,以避免耐藥性的產生。
　　 4、牛支原體單鏈構象多態(tài)性分析(PCR-SSCP)
　　 首先采用柱式液體樣品總核酸抽提試劑盒統一提取每個菌所有代次的基因組DNA,保證試驗條件的一致;然后通過牛支原體特異性片段oppD/F及16srRNA進行基因組DNA純度、完整性鑒定;最后運用單鏈構象多態(tài)性(SSCP)分析法對牛支原體16