四大懷藥試管苗遺傳穩(wěn)定性研究.pdf

1、懷山藥(Dioscorea opposita Thunb.)、懷地黃[Rehmannia glutinosa f.hueichingensis(Chan el Sehih)Hsiao]、懷菊花[Huaiqing chrysanthemum(Dendranthema morifolium)]和懷牛膝(Achyranthes bidentata Bl.)是我國(guó)著名的“四大懷藥”,其獨(dú)特的藥效和滋補(bǔ)作用蜚聲海內(nèi)外。自我國(guó)加入WTO后,GAP認(rèn)

2、證成為農(nóng)產(chǎn)品進(jìn)出口的一個(gè)重要條件,四大懷藥種源的離體培養(yǎng)、脫毒快繁和離體保存等工作是實(shí)現(xiàn)四大懷藥GAP的基礎(chǔ)和前提,因而對(duì)四大懷藥試管苗遺傳穩(wěn)定性進(jìn)行研究具有重要的意義。本文對(duì)超低溫保存前后試管苗、脫毒及未脫毒試管苗以及常溫下保存6年的試管苗進(jìn)行了遺傳穩(wěn)定性研究。結(jié)果如下:
　　 (1)不同基因型懷山藥(B號(hào)山藥、懷慶山藥、鐵棍山藥和太谷山藥)超低溫保存后的再生植株和常溫對(duì)照植株的同工酶(SOD、POD、PPO和AMY)酶譜沒(méi)有

3、差異；RAPD和ISSR分析也均沒(méi)有條帶的增減。即懷山藥超低溫保存后的再生植株在酶蛋白質(zhì)水平和DNA分子水平均保持了穩(wěn)定性。
　　 (2)用篩選出3條引物對(duì)鐵棍山藥類原球莖再生植株和對(duì)照植株進(jìn)行ISSR標(biāo)記,在擴(kuò)增出的13條帶中沒(méi)有發(fā)現(xiàn)差異條帶,即鐵棍山藥經(jīng)類原球莖途徑形成的再生植株遺傳穩(wěn)定性沒(méi)有發(fā)生改變。
　　 (3)用篩選出的7條引物對(duì)懷地黃“85-5”的十個(gè)脫毒株系和一個(gè)未脫毒株系進(jìn)行ISSR標(biāo)記,在擴(kuò)增出來(lái)的36

4、條帶中沒(méi)有發(fā)現(xiàn)差異條帶,懷地黃脫毒苗在DNA分子水平保持了穩(wěn)定性。
　　 (4)超低溫保存后的小黃菊再生植株和常溫對(duì)照植株經(jīng)ISSR分析沒(méi)有發(fā)現(xiàn)差異,在DNA分子水平保持了穩(wěn)定性。
　　 (5)對(duì)常溫保存6年的懷牛膝6個(gè)株系的試管苗進(jìn)行ISSR標(biāo)記,篩選出來(lái)的3條引物共擴(kuò)增出15條帶,沒(méi)有出現(xiàn)新的條帶和缺失條帶,即常溫保存了6年的懷牛膝試管苗在DNA分子水平保持了遺傳穩(wěn)定性。
　　 上述研究結(jié)果為四大懷藥種質(zhì)資源