13494.用于擬干酪乳桿菌代謝組學分析的樣品處理方法研究和應用

1、分類號：幽!旦：墨]密級：UDC：華東理工大學學位論文用于擬干酪乳桿菌代謝組學分析的樣品處理方法研究和應用李曉雪指導教師姓名：王永紅教授華東理工大學國家重點實驗室生化工程研究中心申請學位級別：碩士專業(yè)名稱：微生物學論文定稿日期：20130420論文答辯日期：20130602學位授予單位：華東理工大學學位授予日期：御僻6囂2窶答辯委員會主席：張嗣良教授評閱人：儲炬教授張毅教授華東理工大學碩士學位論文第1頁用于擬干酪乳桿菌代謝組學分析樣品的

2、處理方法研究和應用摘要用氣相色譜質譜聯(lián)用(GasChromatographyMassSpectrometry，GCMS)技術建立了用于檢測擬干酪乳桿菌胞內(nèi)代謝物的代謝組學研究方法?？疾炝瞬煌芙鈩?吡啶、四氫呋喃、甲氧胺鹽酸鹽)和衍生化試劑(N甲基叔丁基二甲基硅基三氟乙酰胺、N，O雙(三甲基硅烷基)三氟乙酰三甲基氯硅烷和N甲基N三甲基硅烷基三氟乙酰胺)，對質譜峰的信號強度和個數(shù)的影響，確定使用毗啶作為溶解劑、N，O雙(甲基硅烷基)氟乙酰

3、三甲基氯硅烷作為衍生劑的兩步衍生法效果最佳。以擬干酪乳桿菌為分析對象，共鑒定出49種胞內(nèi)中間代謝物。方法學考察結果表明，該方法具有良好的精密度、穩(wěn)定性和重現(xiàn)性。此外，還采用主成分分析方法對所獲得的擬干酪乳桿菌發(fā)酵過程胞內(nèi)代謝產(chǎn)物變化數(shù)據(jù)進行了代謝模式識別研究。本文建立了一個用于擬干酪乳桿菌代謝組學研究的樣品滅活和萃取方法。使用單元和多元數(shù)據(jù)分析方法，分析了不同滅活方法(60％甲醇、60％甲醇／09％碳酸銨(pH60)、60％甲醇／09％

4、氯化鈉、40％乙醇／09％氯化鈉和60％甘油／135％氯化鈉)和萃取方法(100％甲醇，70％甲醇，甲醇／氯仿，乙腈／甲醇／水，連續(xù)萃取)作用效果。研究結果表明發(fā)現(xiàn)60％甲醇／09％氯化鈉滅活效率最高并且能夠有效降低胞內(nèi)代謝物滲出，是最適合的滅活方法。此外，建立了連續(xù)萃取方法，先使用70％甲醇萃取然后再使用乙腈／甲醇／水萃取，此萃取方法的萃取效率最高且重復性好。此外，本文將建立的GCMS分析方法和代謝組學研究的樣品處理方法成功用于分析擬

5、干酪乳桿菌發(fā)酵生產(chǎn)乳酸過程中的代謝變化。乳酸發(fā)酵過程隨著發(fā)酵進行，菌體進入穩(wěn)定期后，溶氧往往出現(xiàn)回升現(xiàn)象，同時乳酸產(chǎn)率和得率都有～定程度的下降。采集溶氧(DissolvedOxygen，DO)回升前后發(fā)酵樣品進行代謝物組分析，并采用主成分分析法(PrincipalComponentAnalysis，PCA)對所獲得的代謝物組數(shù)據(jù)進行模式識別。分析結果表明，發(fā)酵過程中伴隨著DO回升，大多數(shù)胞內(nèi)代謝物濃度隨時間變化發(fā)生顯著性差異，主要是EM