15310.5氮雜胞苷誘導(dǎo)煙草brightyellow2細胞程序性死亡

1、學(xué)校代碼：10225學(xué)號：s13171學(xué)位論文5一氮雜胞苷誘導(dǎo)煙草BrightYelloW一2細胞程序性死亡指導(dǎo)教師姓名：申請學(xué)位級別：論文提交日期：授予學(xué)位單位：孫廣玉教授碩士2013年5月東北林業(yè)大學(xué)牟世南東北林業(yè)大學(xué)學(xué)科專業(yè)：植物營養(yǎng)論文答辯日期：2013年6月授予學(xué)位日期：答辯委員會主席：論文評閱人：聾必櫛景大學(xué)摘要細胞程序性死亡(programmedceUdea_tll，PCD)，也稱為細胞凋亡，是生物體中的一些細胞通過自身的

2、基因調(diào)控的一種主動死亡方式。5氮雜胞苷是一種DNA甲基化抑制劑，能摻入DNA，在DNA復(fù)制過程中與DNA分子結(jié)合，抑制DNA甲基化轉(zhuǎn)移酶(DNAmethyltrallsferase，DNMT)，實現(xiàn)去甲基化功能，并能重新激活由于過甲基化而失活的基因，基因組DNA的去甲基化作用使基因組發(fā)生改變，導(dǎo)致生物發(fā)生變異。因此，5一氮雜胞苷(5一Azacytidine)在誘導(dǎo)新物種方面具有重要意義。但是，5一氮雜胞苷抑制DNA甲基化轉(zhuǎn)移酶，會影響到

3、細胞程序化死亡。在國家自然科學(xué)基金項目(30771746)的資助下，本文以5氮雜胞苷(5Azacytidine)處理生長到對數(shù)期(3～4d)的煙草BY2(brightyellow2)懸浮細胞，觀察和測定煙草BY2細胞的細胞程序化死亡形態(tài)和生理變化。主要結(jié)果如下：1對5氮雜胞苷誘導(dǎo)的BY2細胞進行觀察，發(fā)現(xiàn)隨著時間的延長，植物細胞的凋亡過程經(jīng)歷了早期，中期，末期的過程。早期凋亡細胞細胞膜皺縮，與細胞壁分離形成間隙，類似與質(zhì)壁分離狀，細胞核

4、部分邊緣化。中期細胞褶皺程度加大，細胞核凝集成帽形，凝集更為嚴(yán)重。末期細胞皺縮加大，胞質(zhì)渾濁不清，核凝集成小塊。2提取5azac處理后，死亡煙草BV2細胞的DNA進行瓊脂糖凝膠電泳檢測，DNA降解為大約2~4個核小體的片段，表現(xiàn)出DNALadder現(xiàn)象。進行TUNEL檢測，經(jīng)過5azac處理的煙草BY2細胞表達出陽性信號。以上兩個結(jié)果都是細胞程序性死亡的重要生化特征，由此說明5azac誘導(dǎo)的細胞死亡是細胞程序性死亡，并具有典型的生化特征