北山羊體細胞異種克隆技術(shù)的研究.pdf

1、該實驗對北山羊異種體細胞核移植進行了研究.先后對比了山羊卵巢運輸溫度,成熟液中的激素比例以及成熟時間對山羊卵母細胞成熟的影響;探討了不同激活方法對山羊卵母細胞的孤雌激活的影響;并用北山羊和山羊耳部成纖維細胞進行了建系,及核型分析和生長曲線測定;測定了不同生長狀態(tài)的北山羊和山羊成纖維細胞的細胞周期;探討了山羊新鮮卵丘細胞和培養(yǎng)冷凍后解凍的顆粒細胞作為核供體對山羊核移植效率的影響,電脈沖參數(shù)對重構(gòu)胚發(fā)育的影響,以及血清饑餓與完全匯合培養(yǎng)的北

2、山羊和山羊成纖維細胞對重構(gòu)胚發(fā)育的影響;并對異種重構(gòu)胚進行了胚胎移植.實驗得出以下結(jié)論:1、山羊卵巢運輸溫度以20~35℃為佳;成熟液中以FSH8μg/ml,LH0.6IU/ml成熟率較高;而隨著山羊卵母細胞成熟時間延長,其成熟率提高,但去核率下降.2、電激活結(jié)合化學(xué)激活可以更好的激活山羊IVM卵母細胞;在化學(xué)激活液中添加CB,卵裂率與對照組相比差異顯著(P<0.05),但囊胚率差異不顯著.3、組織塊培養(yǎng)法對于原代細胞的培養(yǎng)要優(yōu)于酶消化

3、法;山羊和北山羊的染色體均為60條,且均為端著絲粒染色體;所建北山羊和山羊成纖維細胞系開始生長緩慢、后期生長接觸抑制,屬于正常細胞;北山羊細胞較山羊細胞生長慢,群體倍增時間分別為:4.46d,2.51d.4、新鮮山羊卵丘細胞重構(gòu)胚的融合率與培養(yǎng)顆粒細胞組差顯著(p<0.05),但卵裂率及桑囊胚率差異不顯著.顆粒細胞作為核供體融合率和卵裂率均顯著高于成纖維細胞,但桑囊胚率差異不顯著.匯合培養(yǎng)與饑餓培養(yǎng)的細胞作為核供體在融合率、卵裂率、桑囊

4、胚率上差異均不顯著(p>0.05).5、體外培養(yǎng)第9代北山羊成纖維細胞和第6代山羊成纖維細胞,生長至50％~60％、70％~85％和完全匯合時細胞周期分布存在明顯差異.而血清饑餓和完全匯合處理細胞,細胞周期分布無顯著差異,即采用異種克隆北山羊時可以用生長完全匯合的方法代替血清饑餓處理來得到G0/G1期細胞.6、核移植325枚異種重構(gòu)胚,融合率為33.2％.70枚卵裂重構(gòu)胚移植于14只受體羊,有兩只妊娠(14.3％),但都于75d時流產(chǎn).