16569.轉錄中介體控制體內基因的基礎轉錄水平的分子機理

1、轉錄中介體控制體內基因的基礎轉錄水平的分子機理中文摘要轉錄中介體Mediator是一個在進化上高度保守的，由多個蛋白組成的復合物。它能夠將轉錄激活因子或抑制因子控制的調控信號傳遞給PolII通用轉錄機器。眾多數據證明轉錄中介體在基因轉錄過程中的多個步驟都具有重要作用，包括轉錄招募、起始和延伸，但它調控轉錄延伸的具體機制仍未被完全闡釋。在我們的研究中，我們發(fā)現(xiàn)轉錄中介體的MED23亞基能夠與延伸因子PTEFb的CDK9亞基發(fā)生直接相互作用

2、，影響Egrl基因的轉錄延伸，從而調控Egrl基因的基礎轉錄水平。在非刺激的情況下，野生型的ES細胞中Egrl基因維持著一個本底水平的表達，但在Med23√一的細胞中，Egrl的本底水平比野生型細胞下降大約5倍。通過染色質免疫沉淀的方法我們發(fā)現(xiàn)，在WT及Med23√一細胞中，Egrl的啟動子上都結合有等同數量的PIE(包含PolII及通用轉錄因子GTFs)，Mediator和轉錄激活因子ELKl的結合也幾乎一致。但Med23的敲除使Po

3、lII(Ser2P)在Egrl編碼區(qū)的結合大大減少。與之相一致的是，我們發(fā)現(xiàn)Egrl基因啟動子上結合的CDK9在K0細胞中也少于WT細胞。進一步，我們用體內和體外實驗證明了Med23直接和CDK9發(fā)生蛋白間相互作用。我們的這些發(fā)現(xiàn)對“Mediator如何控制PolII從轉錄起始進入轉錄延伸這個問題”從機制上進行了深入的闡釋。目錄中文摘要IAbstract。。。II目錄III1引言12材料和方法621實驗材料6211試劑6212抗體621