轉(zhuǎn)錄因子c-Jun-AP-1對食管鱗癌分化相關(guān)基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控機理研究.pdf

1、真核基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控與染色質(zhì)修飾、激活劑以及轉(zhuǎn)錄因子對靶基因的調(diào)控有關(guān)。本實驗室以前用cDNA微陣列的方法識別了一組分化相關(guān)基因如富含脯氨酸的蛋白(SPRRs)、角蛋白(keratins)、cystatinA和involucrin在食管癌中表達(dá)明顯下調(diào)，但這些基因的下調(diào)機制仍不清楚。 分析發(fā)現(xiàn)這些基因啟動子區(qū)均含有AP-1結(jié)合位點，為了研究轉(zhuǎn)錄因子AP-1是否調(diào)節(jié)食管癌中這些分化相關(guān)基因的表達(dá)，闡明分化相關(guān)基因在食管癌中下調(diào)的可能

2、機制，首先檢測了c-Jun在食管癌配對組織中的表達(dá)，結(jié)果表明c-Jun在食管癌組織中表達(dá)下調(diào)，這提示轉(zhuǎn)錄因子c-Jun下調(diào)可能與這些分化相關(guān)基因在食管癌中低表達(dá)有關(guān)。 TPA是PKC的激活劑，PKC激活后可引發(fā)MAPK級聯(lián)反應(yīng)，磷酸化激活c-Jun。研究表明，KYSE450細(xì)胞c-Jun表達(dá)水平較低，對TPA刺激敏感，因此選擇KYSE450細(xì)胞作為模型，用TPA及各種MAPK抑制劑誘導(dǎo)或抑制c-Jun的表達(dá)及活性。TPA明顯誘導(dǎo)

3、了c-Jun/AP-1DNA結(jié)合活性和反式激活活性，進而促進了分化相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄和蛋白表達(dá)。 為進一步探討c-Jun/AP-1調(diào)控分化相關(guān)基因的可能通路，用PKC、JNK和MEK特異性化學(xué)抑制劑降低c-Jun的表達(dá)和活性。Westernblot結(jié)果表明，PKC抑制劑(GF109203X)和JNK抑制劑(SP600125)顯著降低了TPA誘導(dǎo)的c-Jun的表達(dá)和磷酸化活性，同時也降低了分化相關(guān)基因keratin4和involucr

4、in的表達(dá)。電泳遷移率變動分析(EMSA)和熒光素酶報道系統(tǒng)分析表明，GF109203X和SP600125顯著抑制了TPA誘導(dǎo)的c-Jun/AP-1與靶基因的結(jié)合活性和反式激活活性，而MEK抑制劑(PD98059)的作用不明顯。 為進一步確定c-Jun對分化相關(guān)基因的調(diào)節(jié)，用染色質(zhì)免疫共沉淀分析(ChIP)證實了分化相關(guān)基因SPRR1A、SPRR2A、SPRR3、keratin13、involucrin和cystatinA是c-

5、Jun和c-Fos的靶基因，雙熒光素酶報道系統(tǒng)發(fā)現(xiàn)c-Jun顯著激活這些靶基因的啟動子活性，因此，TPA通過激活c-Jun/AP-1與分化相關(guān)基因啟動子區(qū)結(jié)合促進了靶基因轉(zhuǎn)錄。 c-Jun位于MAPK通路的終末，是各種信號網(wǎng)絡(luò)調(diào)控的樞紐，本研究發(fā)現(xiàn)c-Jun/AP-1在食管鱗癌細(xì)胞KYSE450中主要通過PKC/JNK途徑激活一組分化相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄和表達(dá)。這將有助于闡明食管癌的分化過程，為食管癌的治療提供新的藥物靶點。